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文檔簡介
1、該文對L-絲氨酸的制備方法進行了綜述,通過比較分析認為,以絲氨酸羥甲基轉移酶(SHMT)為催化劑進行酶法合成是最具發(fā)展前景的工藝路線.酶法制備L-絲氨酸的關鍵在于獲取高效轉化酶,該論文首先從大腸桿菌K12中提取DNA,并利用設計的引物進行PCR反應,并將編碼SHMT基因克隆到載體pMD-18T上進行測序,以證實其序列的正確性,然后將目的基因克隆到表達載體pET-11c上,構建重組質粒pET-11c-SHMT,轉入大腸桿菌TOP10F',
2、以獲取高產(chǎn)SHMT的構建菌.采用大腸桿菌K12為標準菌株來獲取SHMT目的基因,根據(jù)載體上的酶切位點設計引物,利用設計的引物和提取的目的基因進行體外擴增(PCR)反應,并將PCR產(chǎn)物純化后克隆到pMD18-T載體上,再將該質粒轉入大腸桿菌JM109中,篩選重組子、鑒定轉化子,并進行測序.將目的基因克隆到所選的表達載體pET-11c上,轉化到大腸桿菌TOP10F'中,篩選重組子、鑒定轉化子、構建重組質粒,得到含編碼SHMT基因的構建菌.對
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