絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆與表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文對L-絲氨酸的制備方法進(jìn)行了綜述,通過比較分析認(rèn)為,以絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(SHMT)為催化劑進(jìn)行酶法合成是最具發(fā)展前景的工藝路線.酶法制備L-絲氨酸的關(guān)鍵在于獲取高效轉(zhuǎn)化酶,該論文首先從大腸桿菌K12中提取DNA,并利用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR反應(yīng),并將編碼SHMT基因克隆到載體pMD-18T上進(jìn)行測序,以證實(shí)其序列的正確性,然后將目的基因克隆到表達(dá)載體pET-11c上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-11c-SHMT,轉(zhuǎn)入大腸桿菌TOP10F',

2、以獲取高產(chǎn)SHMT的構(gòu)建菌.采用大腸桿菌K12為標(biāo)準(zhǔn)菌株來獲取SHMT目的基因,根據(jù)載體上的酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物,利用設(shè)計(jì)的引物和提取的目的基因進(jìn)行體外擴(kuò)增(PCR)反應(yīng),并將PCR產(chǎn)物純化后克隆到pMD18-T載體上,再將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌JM109中,篩選重組子、鑒定轉(zhuǎn)化子,并進(jìn)行測序.將目的基因克隆到所選的表達(dá)載體pET-11c上,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌TOP10F'中,篩選重組子、鑒定轉(zhuǎn)化子、構(gòu)建重組質(zhì)粒,得到含編碼SHMT基因的構(gòu)建菌.對

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