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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立先天性及非先天性人巨細(xì)胞病毒感染的SD大鼠模型,研究大鼠先天性與非先天性人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染對(duì)子代大鼠海馬NMDA受體NR1、NR2B亞基表達(dá)及學(xué)習(xí)記憶能力的影響,從而探討臨床防治巨細(xì)胞病毒感染的時(shí)機(jī)選擇極其重要性。
方法:
?。?)選取8周齡雌性SPF級(jí)SD大鼠18只,按照雌雄2:1配對(duì),懷孕大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、先天性HCMV感染組和非先天性HC
2、MV感染組,每組各6只。在孕第7~8天,先天性感染組的孕鼠行腹腔內(nèi)注射5×107L-1半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCID50)HCMV懸液0.8mL,對(duì)照組的孕鼠腹腔內(nèi)注射等量的人胚肺成纖維細(xì)胞上清液,非先天性感染組仔鼠于生后第2天顱內(nèi)注射相同HCMV懸液15ul。
?。?)實(shí)驗(yàn)前后觀察對(duì)比孕鼠及子代大鼠的行為學(xué)變化;子代大鼠生后4周分別每組隨機(jī)抽取6只,運(yùn)用Morris水迷宮的方法對(duì)比評(píng)價(jià)子代大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能;
(3)子
3、代大鼠出生后4周分別從每組隨機(jī)抽取8只,取出仔鼠腦組織,采用HE染色的方法觀察仔鼠海馬的形態(tài)學(xué)變化及病理學(xué)改變;應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠海馬組織NMDA受體NR1、NR2B亞基表達(dá)情況。
?。?)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)后分析。
結(jié)果:
?。?)行為學(xué)觀察:對(duì)照組孕鼠及子代大鼠無(wú)異常表現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組(先天性感染組與非先天性感染組)均出現(xiàn)明顯的行為學(xué)異常表現(xiàn)。
(2)HE染色病理學(xué):對(duì)
4、照組海馬結(jié)構(gòu)正常,無(wú)神經(jīng)細(xì)胞缺失現(xiàn)象,細(xì)胞排列整齊均勻,胞核完整,核仁明顯;與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組(先天性感染組與非先天性感染組)子代大鼠出現(xiàn)不同程度的海馬區(qū)神經(jīng)元缺失或水腫、組織結(jié)構(gòu)松散、顆粒層細(xì)胞減少、細(xì)胞核消失等現(xiàn)象。
(3)子代大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):先天性感染組子代大鼠第1~4天的逃避潛伏期分別(dl:95.83±18.36;d2:70.36±11.52;d3:52.73±11.39;d4:38.96±5.27),
5、比對(duì)照組第1~4天逃避潛伏期(dl:46.98±16.74;d2:29.83±10.64;d3:22.41±12.16;d4:15.69±6.24)延長(zhǎng),兩組間差異存在顯著性(P<0.01);非先天性感染組子代大鼠第1~4天的逃避潛伏期分別(dl:89.69±16.15;d2:68.27±9.83;d3:49.85±12.21;d4:35.41±5.51),比對(duì)照組間差異存在顯著性(P<0.01)。Morris水迷宮空間探索能力比較,先
6、天性感染組穿越平臺(tái)次數(shù)3.96±1.47,顯著低于對(duì)照組7.95±1.59(P<0.01);非先天性感染組穿越平臺(tái)次數(shù)4.38±1.22,亦顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。先天性感染組目標(biāo)象限游泳時(shí)間占總時(shí)間的百分?jǐn)?shù)(0.19±0.16)、非先天性感染組(0.23±0.10),也均低于對(duì)照組(0.45±0.12),差異具有顯著性(P<0.01)。(4)子代大鼠免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:海馬DG區(qū),先天性感染組NR1(0.176土0.033)
7、、NR2B(0.120土0.029),非先天性感染組NR1(0.202土0.036)、NR2B(0.141土0.026)較對(duì)照組NR1(0.286土0.031)、NR2B(0.182土0.024)均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pa<0.01)。海馬CA1區(qū),先天性感染組NR1(0.232土0.021)、NR2B(0.189土0.027),非先天性感染組NR1(0.257土0.028)、NR2B(0.215土0.024)較對(duì)照組NR1(0.3
8、21土0.026)、NR2B(0.283土0.023)均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pa<0.01)。
結(jié)論:
?。?)人巨細(xì)胞病毒先天性感染組和非先天性感染組大鼠模型建立成功;
?。?)根據(jù)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果,HCMV先天性感染和非先天性感染均可導(dǎo)致子代大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力受損;
?。?)HCMV先天性感染組和非先天性感染組子代大鼠海馬區(qū)HE染色光鏡下觀察海馬組織,均可出現(xiàn)病理學(xué)改變;
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