低分子肝素抑制新生鼠肝細(xì)胞先天性感染人巨細(xì)胞病毒的實驗研究.pdf

1、目的:探討低分子肝素(LMWH)在孕期對新生鼠肝細(xì)胞先天性感染人巨細(xì)胞病毒(HCMV)的病理改變和病毒DNA載量的影響。以確定LMWH抗HCMV先天性感染的合適劑量。
　　 方法:取健康純系清潔級Balb／c小鼠48只,10周齡,體重量22～30 g。隨機(jī)選擇配對,每對雌雄鼠各1只。實驗組20對,正常對照組4對。實驗組每4對為1組,每只分別于腹腔內(nèi)注射6.0logTCID50(半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量,又稱50％組織細(xì)胞感染量)HC

2、MV AD169接種至雌雄小鼠腹腔。正常對照組4對,每只于腹腔內(nèi)注射相應(yīng)細(xì)胞維持液DMEM0.5 ml。所有小鼠于接種后配對,隔離喂養(yǎng),并觀察受精情況,記錄受精時間。發(fā)現(xiàn)妊娠后,分別給予實驗Ⅰ組皮下注射LMWH1000U／kg、Ⅱ組皮下注射LMWH500U／kg、Ⅲ組皮下注射LMWH250U／kg和Ⅳ組肌肉注射更昔洛韋60mg／kg各10天；Ⅴ組為陽性對照組孕鼠不注射低分子肝素或更昔洛韋。每組隨機(jī)取10只新生鼠,生產(chǎn)后1天處死新生鼠,取

3、出新生鼠肝臟,進(jìn)行病理學(xué)檢查和熒光定量-PCR檢測(FQ-PCR)。
　　 結(jié)果:1)LMWH1000u／kg(Ⅰ)組肝組織病理損害較陽性對照組明顯減輕,HCMV DNA載量為1.60×103copies／50mg較陽性對照組為5.91×107copies／50mg顯著性降低(P<0.01)；與更昔洛韋治療(Ⅳ)組1.75×103copies／50mg組相比差異無顯著性(P>0.05)。2)LMWH500U／kg(Ⅱ)組肝組織炎

4、癥變化較陽性對照組稍減輕,而LMWH250U／kg(Ⅲ)組肝組織較陽性對照組的炎癥反應(yīng)無明顯變化,LMWH250U／kg(Ⅲ)組HCMV DNA載量為5.49x107與陽性對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論:在 HCMV AD169株先天性感染Balb／c新生鼠肝細(xì)胞后。LMWH1000U／kg在孕期干預(yù)能夠顯著性降低其肝細(xì)胞病毒感染和復(fù)制,減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)。為低分子肝素成為新的抗HCMV先天性感染的抗病毒藥的

5、篩選提供了理論基礎(chǔ)。
　　 第二部分
　　 目的:研究低分子肝素(LMWH)對新生鼠肝細(xì)胞先天性感染人巨細(xì)胞病毒(HCMV)的病毒學(xué)和病理學(xué)方面影響。探討LMWH在孕期和生后不同的時期抗HCMV先天性感染鼠肝細(xì)胞的效果如何。
　　 方法:取健康純系清潔級Balb／c鼠60只,10周齡,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組6對,設(shè)實驗組3組、陽性對照組和空白對照組。實驗組和陽性對照腹腔接種6.0logTCID50HCMV

6、AD169,空白對照組腹腔注射DMEM0.5ml／只,然后交配。實驗Ⅰ組的雌鼠在孕期給予皮下注射LMWH1000U／kg10天；Ⅱ組的雌鼠在孕期給予皮下注射LMWH1000U／kg5天,待生產(chǎn)后再給新生鼠皮下注射LMWH1000U／kg5天,Ⅲ組在生產(chǎn)后予新生鼠皮下注射LMWH1000U／kg10天。待生產(chǎn)后10天處死新生鼠,取出新生鼠肝臟,進(jìn)行病毒分離、干濕重測定、病理學(xué)檢查和熒光定量-PCR檢測。
　　 結(jié)果:1)在陽性對照

7、組新生鼠的肝組織勻漿上清液中10天左右分離出HCMV,而LMWH干預(yù)的3組新生鼠的肝組織勻漿上清液中24天左右分離出HCMV；在病毒分離出現(xiàn)典型細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)的細(xì)胞培養(yǎng)液中檢測出HCMV DNA。2)病理學(xué)證實陽性對照組肝組織有炎性改變,肝細(xì)胞濁腫變性、空泡變性,核內(nèi)有特異性HCMV包涵體,部分肝細(xì)胞呈壞死表現(xiàn),而LMWH干預(yù)組病理結(jié)果表明肝組織僅有輕度炎性改變和肝細(xì)胞濁腫變性,甚或炎癥改變不明顯。3)LMWH干預(yù)組肝組織含水量

8、較陽性對照組明顯降低。4)HCMV DNA載量LMWH干預(yù)的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別為3.34×103copies／50mg、3.16×103copies／50mg和4.55×103copies／50mg較陽性對照組5.48×107copies／50mg顯著性降低(p<0.01)；LMWH干預(yù)組間相比差異無顯著性(p>0.05)。
　　 結(jié)論:在HCMV AD169株先天性感染Balb／c胎鼠和新生鼠肝細(xì)胞后,用LMWH在宮內(nèi)和出生后干