SDF-1-CXCR4與HIF-1在卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中相互作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　卵巢癌系女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其死亡率位高不下，較高的侵襲性和轉(zhuǎn)移性是導(dǎo)致患者以后不良的主要因素。大約75％左右患者一經(jīng)診斷已為晚期，由于患者已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，致使治療棘手，患者已失去最佳治療時(shí)機(jī)預(yù)后極差。因此，了解卵巢癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)臨床治療及提高患者預(yù)后有著十分重要的作用。
　　腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的多因素過(guò)程，趨化因子則在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子SDF-1（stromal deri

2、ved factor-1,又稱CXCR12）作為趨化因子家族中的一員，已成為近些年來(lái)研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。SDF-1主要與其相應(yīng)的受體CXCR4結(jié)合從而誘導(dǎo)卵巢癌的轉(zhuǎn)移進(jìn)程，這一過(guò)程主要由于激活了下游的p38MAPK/ PI-3K信號(hào)通路。p38MAPK/ PI-3K信號(hào)通路被公認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中一條經(jīng)典的信號(hào)通路，缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）發(fā)揮其作用被報(bào)道也依靠其上游此通路的激活

3、作用。鑒于兩者發(fā)揮作用依賴共同的信號(hào)通路，我們?cè)囅雰烧呤欠窬哂邢嚓P(guān)性，其相關(guān)機(jī)制是否為p38MAPK/ PI-3K信號(hào)通路作用？因此我們的實(shí)驗(yàn)主要研究SDF-1-CXCR4與HIF-1在卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中相互作用及機(jī)制，為卵巢癌的臨床治療提供新的思路。
　　本實(shí)驗(yàn)主要研究SDF-1α與HIF-1α在卵巢癌中的相關(guān)作用及其機(jī)制，首次將兩者在卵巢癌中聯(lián)系起來(lái)，本研究證明了兩者在卵巢癌組織中呈正相關(guān)，并對(duì)其具體通路進(jìn)行了研究，闡明了兩者間

4、作用機(jī)制。
　　目的：
　　1.SDF-1α與HIF-1α在卵巢癌組織中的表達(dá)是否相關(guān)。
　　2.SDF-1-CXCR4生物軸是否會(huì)激活HIF-1的表達(dá)。
　　3.HIF-1轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的增加是否會(huì)促進(jìn)CXCR4的表達(dá)。
　　4.SDF-1對(duì)PI3K/AKT、MAPK信號(hào)通路和HIF-1激活作用是否一致
　　5.探討HIF-1是否會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)CXCR4的表達(dá)以及VEGF的表達(dá)從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移。

5、　　方法：
　　1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)卵巢癌組織中SDF-α1與HIF-1α的表達(dá)；
　　2.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)各個(gè)細(xì)胞組中HIF-1α的mRNA水平。
　　3.運(yùn)用Western-blot檢測(cè)細(xì)胞中AKT/p-AKT、p-38/p-p38、HIF-1α、CXCR4的表達(dá)水平。
　　4.采用ELISA檢測(cè)VEGF的含量。
　　5.Tranwell侵襲小室、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移。
　　結(jié)

6、果：
　　1.SDF-1α與HIF-1α在卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.475，P＜0.01）；
　　2.qRT-PCR結(jié)果證明，隨著加入外源性SDF-1量及時(shí)間增加，HIF-1α的mRNA水平依次增加（P＜0.05）。
　　3.Western-blot分析顯示，control、control+SDF-1、control+CXCR4封閉抗體三組中，control+SDF-1組中p-AKT、p-p38量明顯增高（P

7、＜0.01）；control、control+SDF-1、control+CXCR4封閉抗體、control+SDF-1α+ LY294002四組中，control+SDF-1組中HIF-1水平明顯增高（P＜0.01）；control+ SDF-1、卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染HIF shRNA+ SDF-1兩組中，control+ SDF-1組CXCR4量明顯增高（P＜0.01）。
　　4.ELISA檢測(cè)結(jié)果證明，control+ SDF-1

8、、卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染HIF shRNA+ SDF-1兩組中，control+ SDF-1組VEGF量明顯增高（P＜0.05）。
　　5.Tranwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果：SDF-1組較空白組和對(duì)照組HIF shRNA+ SDF-1明顯增強(qiáng)，有顯著性差異（P<0.01）。
　　6.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)于12h、24h、36h后劃痕處的距離進(jìn)行分析SDF-1組較空白組和對(duì)照組HIF shRNA+ SDF-1明顯增強(qiáng)，有顯著性差異（P<0.0