間充質(zhì)干細胞及SDF-1-CXCR4在哮喘大鼠氣道炎癥及氣道重塑中的作用.pdf

1、目的:(1)通過比較慢性哮喘大鼠和正常大鼠的外周血中間充質(zhì)干細胞含量的差異，初步判斷間充質(zhì)干細胞與哮喘致病過程之間是否可能存在聯(lián)系。(2)通過觀察哮喘大鼠肺組織、氣道壁SDF-1、CXCR4表達的變化，研究SDF-1、CXCR4是否參與哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重塑過程。通過以上實驗研究，為后期靜脈注射移植間充質(zhì)干細胞，研究其在慢性哮喘氣道炎癥及氣道重塑中的作用及SDF-1/CXCR4信號軸對其的影響打下實驗基礎(chǔ)。
　　方法:(1)將

2、18只SPF級SD雌性大鼠隨機分為:正常對照組、哮喘4周組和哮喘8周組，每組6只。卵清蛋白(OVA)致敏后，霧化吸入OVA制作哮喘模型。哮喘模型成功后，測定氣道壓力;通過HE染色、Image-ProPlus圖像分析軟件分析大鼠支氣管壁的嗜酸性粒細胞(ESO)浸潤情況、測定支氣管管腔的內(nèi)周長、管壁面積、支氣管平滑肌面積、平滑肌細胞核數(shù);采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，通過流式細胞儀檢測各組間充質(zhì)干細胞的含量，并分析其與哮喘氣道炎癥

3、及氣道重塑的關(guān)系;(2)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測各組大鼠肺組織SDF-1、CXCR4的表達變化;用免疫組織化學(xué)染色法(IHC)檢測各組大鼠氣道壁SDF-1表達的變化;統(tǒng)計數(shù)據(jù)并分析SDF-1、CXCR4與哮喘氣道重塑及氣道炎癥的關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)哮喘4周組、哮喘8周組大鼠的氣道反應(yīng)性、氣道壁EOS計數(shù)、支氣管管壁面積、支氣管平滑肌面積、平滑肌細胞核數(shù)目、外周血中間充

4、質(zhì)干細胞比例均較正常對照組顯著增加(P＜0.01或P＜0.05);哮喘兩組間上述指標差異顯著(P＜0.01);Pearson線性相關(guān)顯示:各組大鼠外周血單個核細胞中間充質(zhì)干細胞的含量與氣道反應(yīng)性、EOS浸潤數(shù)、支氣管壁面積、支氣管平滑肌厚度及支氣管平滑肌細胞核數(shù)均呈正相關(guān)（均P＜0.001）。(2)RT-PCR檢測結(jié)果顯示哮喘4周組、哮喘8周組大鼠肺組織SDF-1、CXCR4的表達與正常對照組相比均顯著增強，哮喘8周組的SDF-1及CX

5、CR4的表達較哮喘4周組亦明顯增強，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）;Western blotting檢測結(jié)果同RT-PCR結(jié)果基本一致;免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示哮喘4周組、哮喘8周組大鼠氣道壁SDF-1的表達較正常對照組顯著增加，哮喘8周組的SDF-1的表達量亦高于哮喘4周組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）;Pearson線性相關(guān)顯示:各組大鼠肺組織、氣道壁SDF-1、CXCR4mRNA及蛋白的表達與氣道反應(yīng)性、EOS浸潤數(shù)