晚期糖基化終末產(chǎn)物受體通過穩(wěn)定β-catenin信號參與調(diào)控TDI哮喘氣道炎癥.pdf

1、目的：
　　甲苯二異氰酸酯(TDI)是哮喘重要的致病因素之一。其所致的哮喘主要病理特征為氣道中性粒和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤及氣道重塑，然具體發(fā)病機(jī)制不明。研究表明，晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)及β-catenin信號在哮喘發(fā)病中扮演重要角色，但其在TDI哮喘中的作用尚未闡明。本研究意在探討RAGE和β-catenin在TDI哮喘中的作用及其中機(jī)制。
　　內(nèi)容與方法：
　　一、建立TDI哮喘模型
　　第1、8天用0

2、.3％TDI經(jīng)小鼠耳背皮膚致敏，第15、18、21天霧化吸入激發(fā)，按激發(fā)所用TDI濃度及次數(shù)分組:①1％TDI1組:第15天用1％TDI激發(fā)1次;②1％TDI2組:第15、18天用1％TDI激發(fā)2次;③1％TDI3組:第15、18、21天用1％TDI激發(fā)3次;④3％TDI1組:第15天用3％TDI激發(fā)1次;⑤3％TDI2組:第15、18天用3％TDI激發(fā)2次;⑥3％TDI3組:第15、18、21天用3％TDI激發(fā)3次。檢測各組小鼠的氣道

3、反應(yīng)性、氣道周圍炎癥細(xì)胞、血清IgE、Th1/Th2炎癥指標(biāo)。
　　二、在TDI哮喘模型上干預(yù)RAGE
　　按“一”中的方法建立TDI哮喘小鼠模型，激發(fā)前經(jīng)腹腔給RAGE拮抗劑[FPS-ZM1及RAGE antagonist peptide(RAP)]，觀察各項(xiàng)哮喘指標(biāo)的變化，同時檢測肺組織內(nèi)β-catenin的表達(dá)和分布情況。
　　三、體內(nèi)干預(yù)β-catenin信號
　　構(gòu)建TDI哮喘小鼠模型，自第1次激發(fā)開始

4、連續(xù)7天每天給小鼠腹腔注射β-catenin信號阻斷劑（XAV-939及ICG-001），觀察各項(xiàng)哮喘指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：
　　一、皮膚致敏后經(jīng)霧化吸入3％TDI激發(fā)3次可建立TDI哮喘模型
　　與對照相比，1％TDI1、1％TDI2及3％TDI1組的氣道反應(yīng)性無明顯增高，氣道周圍幾無炎癥浸潤，淋巴上清IL-4、IFN-γ及血清IgE水平亦不高;1％TDI3及3％TDI2組的氣道周圍可見少許炎癥細(xì)胞，BALF中性粒

5、細(xì)胞數(shù)目稍增多，但氣道高反應(yīng)性、IL-4及IFN-γ水平都不高;3％TDI3組的氣道反應(yīng)性增高，支氣管周圍炎癥細(xì)胞浸潤明顯，BALF中炎癥細(xì)胞顯著增多，IL-4、IFN-γ及IgE均升高。
　　二、阻斷RAGE可減輕TDI哮喘小鼠氣道炎癥并抑制TDI誘導(dǎo)的β-catenin活化
　　拮抗RAGE可下調(diào)TDI哮喘小鼠RAGE及其配體的表達(dá)，減輕TDI誘導(dǎo)的氣道高反應(yīng)性及氣道周圍炎癥浸潤，減少BALF中炎癥細(xì)胞數(shù)目，并抑制Th2

6、炎癥。同時我們發(fā)現(xiàn)，β-catenin在TDI哮喘小鼠肺組織細(xì)胞膜上的表達(dá)減少，在胞漿及胞核的表達(dá)增多;與此一致的是，磷酸化Akt(Ser473)、磷酸化GSK3β(Ser9)及活化的β-catenin水平均升高，而使用RAGE抑制劑可以部分逆轉(zhuǎn)上述這些表現(xiàn)，同時下調(diào)TDI誘導(dǎo)的β-catenin靶基因表達(dá)。
　　三、阻斷β-catenin信號可減輕TDI哮喘小鼠氣道炎癥
　　β-catenin抑制劑明顯減輕了TDI哮喘小鼠