版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、牙周炎作為常見(jiàn)的口腔慢性炎癥性疾病,常導(dǎo)致牙周支持組織破壞,進(jìn)而造成牙齒脫落,并可以影響一些全身性疾病的發(fā)病和病程。但是至今對(duì)于牙周炎發(fā)病及病程發(fā)展的機(jī)制尚不完全明確。牙周炎在發(fā)病過(guò)程中,炎性組織可以產(chǎn)生血管生成因子和炎性細(xì)胞因子,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)皮向分化,最終形成大量新生血管?,F(xiàn)已證實(shí)牙周膜干細(xì)胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)具有向內(nèi)皮細(xì)胞分化并形成血管的能力,但是對(duì)于調(diào)控其分化的胞內(nèi)機(jī)制尚
2、不完全明確。細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞活動(dòng)的關(guān)鍵通路之一,在真核細(xì)胞內(nèi)廣泛存在,影響著細(xì)胞分裂增殖、分化、自噬、凋亡等多種生理病理行為。ERK1/2是ERK通路的關(guān)鍵蛋白,ERK1/2的磷酸化和去磷酸化是將分子信號(hào)從細(xì)胞表面受體轉(zhuǎn)導(dǎo)至核內(nèi)的關(guān)鍵步驟。當(dāng)細(xì)胞受到細(xì)胞外基質(zhì)的生長(zhǎng)因子刺激后, ERK1/2通過(guò)一系列酶反應(yīng)被激活,從而對(duì)細(xì)胞的活動(dòng)進(jìn)行調(diào)
3、節(jié)。
牙周膜干細(xì)胞在不同局部微環(huán)境下的多向分化能力是否發(fā)生變化、如何變化、受到什么因素或信號(hào)的調(diào)節(jié)、對(duì)生物學(xué)功能有何影響等已經(jīng)有一些研究報(bào)道,但主要集中于成骨分化方向;對(duì)其他方向分化可能及影響程度等尚少有研究。
本課題針對(duì)于此,使用TNF-α模擬炎癥微環(huán)境,觀察ERK通路的活化對(duì)正常及炎癥微環(huán)境下PDLSCs內(nèi)皮向分化的調(diào)控作用;為進(jìn)一步深入探討不同分化方向能力變化和選擇性調(diào)控奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
1.研究目的:
4、
探討正常及炎癥微環(huán)境下,ERK通路在PDLSCs內(nèi)皮向分化中的作用,為PDLSCs分化調(diào)控應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1.1.體外培養(yǎng)和鑒定人牙周膜干細(xì)胞(hPDLSCs)。使用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)聯(lián)合誘導(dǎo)PDLSCs內(nèi)皮向分化,檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞內(nèi)
5、皮向分化相關(guān)的相關(guān)指標(biāo)水平,建立PDLSCs內(nèi)皮向分化模型。在體外使用炎性因子TNF-α模擬體內(nèi)炎癥微環(huán)境對(duì)PDLSCs進(jìn)行刺激,并檢測(cè)內(nèi)皮向分化相關(guān)指標(biāo),建立炎癥微環(huán)境內(nèi)皮向分化模型。
1.2.按所建立正常及炎癥微環(huán)境內(nèi)皮向分化模型,對(duì)PDLSCs進(jìn)行內(nèi)皮向分化誘導(dǎo),檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖情況和內(nèi)皮向分化相關(guān)指標(biāo)水平。比較兩種不同誘導(dǎo)環(huán)境對(duì)PDLSCs增殖和內(nèi)皮向分化的影響。
1.3.按照模型誘導(dǎo)PDLSCs分化,觀察
6、細(xì)胞內(nèi)ERK1/2磷酸化水平隨不同時(shí)間點(diǎn)和誘導(dǎo)方法而發(fā)生的改變。
1.4.阻斷ERK1/2磷酸化過(guò)程后,在正常及炎癥微環(huán)境對(duì)PDLSCs進(jìn)行內(nèi)皮向分化誘導(dǎo),檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖情況和分化相關(guān)指標(biāo)水平。比較阻斷前后細(xì)胞分化能力的改變,明確ERK通路對(duì)PDLSCs內(nèi)皮向分化的作用。
2.研究方法:
2.1.采用酶消化法獲取原代牙周膜細(xì)胞,單細(xì)胞克隆純化細(xì)胞??寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面表達(dá)
7、間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物的陽(yáng)性率,成骨及成脂誘導(dǎo)定性檢測(cè)細(xì)胞多向分化能力。
2.2.對(duì)兩種誘導(dǎo)環(huán)境下的PDLSCs進(jìn)行內(nèi)皮向分化誘導(dǎo), Real-time PCR檢測(cè)PDLSCs誘導(dǎo)后內(nèi)皮相關(guān)基因CD31、VEGF及VE-cadherin mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞中CD31+和VE-cadherin+細(xì)胞比例。MatrigelTM基質(zhì)膠內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞管腔形成實(shí)驗(yàn),并拍照統(tǒng)計(jì)管腔形成數(shù)目、分支節(jié)點(diǎn)數(shù)及管腔長(zhǎng)度。根據(jù)這些
8、指標(biāo)比較正常及炎癥微環(huán)境PDLSCs內(nèi)皮向分化能力的差異。
2.3.使用U0126作為ERK1/2磷酸化阻斷劑,溶劑DMSO作為陰性對(duì)照。提取PDLSCs誘導(dǎo)后0h、1h、3h、6h、12h的蛋白,Western blotting檢測(cè)ERK1/2磷酸化水平。正常及炎癥微環(huán)境內(nèi)誘導(dǎo)以及加入U(xiǎn)0126后分化誘導(dǎo)1h,提取蛋白檢測(cè)ERK1/2磷酸化水平。
2.4.加入U(xiǎn)0126阻斷ERK1/2磷酸化過(guò)程,正常及炎癥微環(huán)境內(nèi)
9、對(duì)PDLSCs進(jìn)行內(nèi)皮向分化誘導(dǎo),DMSO作為陰性對(duì)照,Real-time PCR檢測(cè)誘導(dǎo)后PDLSCs內(nèi)皮相關(guān)基因CD31、VEGF及VE-cadherin mRNA轉(zhuǎn)錄水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞中CD31+和VE-cadherin+細(xì)胞比例;MatrigelTM基質(zhì)膠內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞管腔形成實(shí)驗(yàn),并拍照統(tǒng)計(jì)管腔形成數(shù)目、分支節(jié)點(diǎn)數(shù)及管腔長(zhǎng)度并進(jìn)行比較。比較阻斷ERK1/2磷酸化過(guò)程對(duì)PDLSCs在兩種條件下內(nèi)皮向分化能力的差異。
10、> 3.研究結(jié)果:
3.1.原代培養(yǎng)純化后細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,呈放射狀排列,長(zhǎng)軸之間近于平行。鑒定細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞具有克隆形成能力;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示純化所得細(xì)胞高表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志物,低表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志物;成骨及成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞具有成骨和成脂分化潛能。
3.2.PDLSCs內(nèi)皮向分化誘導(dǎo)后檢測(cè)內(nèi)皮向分化指標(biāo),Real-time PCR和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,對(duì)于炎癥微環(huán)境中誘導(dǎo)分化的PDLSCs,VE-cadheri
11、n和VEGF mRNA轉(zhuǎn)錄水平、CD31+和VE-cadherin+細(xì)胞比例顯著高于正常環(huán)境培養(yǎng)條件下,管腔形成能力也明顯高于正常環(huán)境培養(yǎng)條件下內(nèi)皮向分化誘導(dǎo)的PDLSCs。
3.3.Western blotting顯示PDLSCs經(jīng)過(guò)內(nèi)皮向分化誘導(dǎo),ERK1/2磷酸化水平升高,其中1h和3h顯著高于誘導(dǎo)前。選取誘導(dǎo)后1h這一時(shí)間點(diǎn),分別在正常及炎癥微環(huán)境誘導(dǎo)和加入U(xiǎn)0126后進(jìn)行內(nèi)皮向分化誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)炎癥微環(huán)境中誘導(dǎo)的p-ER
12、K1/2水平高于正常條件下,而U0126可以阻斷誘導(dǎo)引起的ERK1/2的磷酸化過(guò)程。
3.4.Real-time PCR和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,加入U(xiǎn)0126后,PDLSCs的內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)mRNA轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)水平以及管腔形成能力均明顯降低,表明阻斷了ERK1/2磷酸化過(guò)程會(huì)抑制PDLSCs的內(nèi)皮向分化過(guò)程。但炎癥微環(huán)境中阻斷ERK1/2磷酸化對(duì)內(nèi)皮向分化過(guò)程的抑制并不完全。
結(jié)論:
PDLSCs被VEG
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 正常和炎癥來(lái)源的人牙周膜干細(xì)胞內(nèi)皮向分化能力的比較研究.pdf
- 炎癥微環(huán)境影響下Wnt信號(hào)通路對(duì)牙周膜干細(xì)胞骨向分化的調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- miR-17調(diào)控人牙周膜干細(xì)胞骨向分化的機(jī)制研究.pdf
- 靜壓力作用下經(jīng)典Wnt信號(hào)通路調(diào)控牙周膜干細(xì)胞骨向分化的機(jī)制研究.pdf
- Wnt-β-catenin信號(hào)通路對(duì)炎癥狀態(tài)下牙周膜干細(xì)胞成骨分化的調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- 多潛能成體干細(xì)胞內(nèi)皮分化和高糖對(duì)內(nèi)皮分化的影響及相關(guān)信號(hào)通路機(jī)制探討.pdf
- Wnt-β-catenin信號(hào)通路對(duì)炎癥微環(huán)境中喉黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞肌向分化能力的調(diào)控.pdf
- 應(yīng)力對(duì)炎癥微環(huán)境下牙周膜細(xì)胞成骨能力的調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- 胚胎干細(xì)胞或胚胎樣干細(xì)胞向血管細(xì)胞的分化及調(diào)控機(jī)制研究.pdf
- lncRNA對(duì)炎癥條件下人牙周膜干細(xì)胞成骨分化調(diào)控作用的研究.pdf
- 內(nèi)皮祖細(xì)胞調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞分化及其機(jī)制研究.pdf
- NF-κB信號(hào)通路在炎癥狀態(tài)下人牙周膜干細(xì)胞成骨分化中的調(diào)控作用.pdf
- 低氧對(duì)人牙周膜干細(xì)胞骨向分化的影響.pdf
- microRNa-543靶向調(diào)控TOB2促進(jìn)人牙周膜干細(xì)胞骨向分化的功能和機(jī)制研究.pdf
- 牙囊細(xì)胞對(duì)健康-炎癥組織來(lái)源牙周膜干細(xì)胞增殖、分化及干性的影響.pdf
- 人食管鱗狀細(xì)胞癌微環(huán)境下樹(shù)突狀細(xì)胞內(nèi)皮樣分化及其機(jī)制的研究.pdf
- 牙周膜細(xì)胞膜片的構(gòu)建及脂肪干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的初步研究.pdf
- Notch信號(hào)通路調(diào)控人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的研究.pdf
- Wnt-β-catenin信號(hào)通路在黃芩素促進(jìn)人牙周膜細(xì)胞骨向分化中的調(diào)控.pdf
- miR-155-5p調(diào)控骨髓間質(zhì)干細(xì)胞向胃癌間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用及機(jī)制研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論