多潛能成體干細(xì)胞內(nèi)皮分化和高糖對內(nèi)皮分化的影響及相關(guān)信號通路機制探討.pdf

1、目的：觀察大鼠MAPCs在無外源性生長因子的分化培養(yǎng)條件下向內(nèi)皮分化過程中細(xì)胞形態(tài)學(xué)，內(nèi)皮標(biāo)志物和功能的改變；研究在分化過程中相關(guān)生長因子的分泌趨勢以及對分化的影響。 方法：大鼠MAPCs作為本實驗的研究材料，在無外源性生長因子的分化條件下培養(yǎng)。在分化過程中觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。Q-RT-PCR檢測內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31、Flk1、vWF、VE-eadherin和干細(xì)胞標(biāo)志物oct4在分化過程中mRNA水平的改變。細(xì)胞免疫熒光檢測

2、相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物和干細(xì)胞標(biāo)志物在分化過程中蛋白水平的改變。ELISA檢測大鼠MAPCs分化過程中生長因子分泌的變化。Dil-acLDL和Matrigel用于檢測分化后細(xì)胞的內(nèi)皮功能。培養(yǎng)基中加外源性VEGF、VEGF中和抗體和TGFβ1中和抗體，Q-RT-PCR檢測相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物的改變，研究生長因子對大鼠MAPCs內(nèi)皮分化的影響。 結(jié)果：大鼠MAPCs在無外源性生長因子的分化培養(yǎng)條件下，細(xì)胞形態(tài)逐漸改變，形成梭形和鵝卵石樣

3、的橢圓形細(xì)胞。同時也表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31、Flk1、vWF和VE-cadherin，并且能攝入Dil-acLDL，在Matrigel上形成二維管狀結(jié)構(gòu)。分化的細(xì)胞還能分泌VEGF和TGFβ1，外源性的VEGF和VEGF中和抗體對大鼠MAPCs的CD31和Flk1表達(dá)無影響(P>0.05)，而TGFβ1中和抗體則在分化第3天顯著降低細(xì)胞CD31和Flk1的表達(dá)(P<0.05)。 結(jié)論：首次報道了大鼠MAPCs在無外源性生長因