血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2-血管緊張素(1-7)-Mas軸通過調(diào)控自噬影響肺纖維化的作用機制.pdf

1、特發(fā)性肺纖維化(IPF)是一種慢性不可逆的致死性疾病。在IPF的發(fā)展過程中，肺成纖維細胞受到激活并且分泌大量的細胞外基質(zhì)，以及異常的損傷修復，最終導致了纖維化的形成。
　　腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是本課題研究重點，包含血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)-血管緊張素(Ang)Ⅱ-AngⅡ-1型受體(AT1R)軸和ACE2-Ang(1-7)-Mas軸。AngⅡ和Ang(1-7)作為RAS中的代表性多肽，二者功能相對拮抗，在機體的水電解質(zhì)

2、代謝、血管收縮等維持機體生存方面有著重要作用，近些年發(fā)現(xiàn)其與纖維化有密切聯(lián)系。前期的研究及近年對RAS在器官纖維化中的研究表明，ACE-AngⅡ-AT1R軸增加氧化應激，誘導心肌、血管、肝臟和肺臟的纖維化，而ACE2-Ang(1-7)-Mas軸通過拮抗ACE-AngⅡ-AT1R軸，降低氧化應激發(fā)揮抗纖維化作用。
　　本研究繼續(xù)探討ACE2-Ang(1-7)-Mas軸改善肺纖維化的新機制，并將自噬作為研究的新方向。自噬是細胞內(nèi)各種組

3、分被運送至溶酶體并被降解和重新利用的過程，不僅參與生理活動的調(diào)節(jié)，還參與調(diào)節(jié)氧化應激、器官纖維化等多種病理過程。自噬能夠改善肺纖維化，但目前對于ACE2和Ang(1-7)在自噬方面的研究，主要在心腦血管系統(tǒng)，大多表現(xiàn)為抑制自噬，但也有誘導自噬的報道。ACE2-Ang(1-7)-Mas軸的自噬水平如何，干預自噬對于氧化應激和肺纖維化的影響如何，將是本研究關(guān)注的重點。
　　目的：
　　探究ACE2-Ang(1-7)-Mas軸自噬

4、水平如何，調(diào)控自噬對氧化應激和肺纖維化的影響。
　　方法：
　　1、原代肺成纖維細胞分離、純化、鑒定及培養(yǎng)。
　　2、細胞ATP含量測定。
　　3、動物模型建立。
　　4、肺組織切片染色和免疫組化。
　　5、蛋白質(zhì)免疫印跡法。
　　結(jié)果：
　　探究Ang(1-7)和ACE2對自噬蛋白表達水平的影響，干預ACE2-Ang(1-7)-Mas軸和自噬通路，檢測自噬、膠原和NOX4蛋白表達水平。博

5、來霉素誘導小鼠肺纖維化，評價小鼠肺組織纖維化水平和NOX4、自噬蛋白水平，進一步驗證ACE2-Ang(1-7)-Mas軸改善肺纖維化的機制。
　　結(jié)論：
　　1.Ang(1-7)誘導自噬，降低AngⅡ誘導的膠原和NOX4水平，Mas拮抗劑A779通過抑制自噬逆轉(zhuǎn)這一作用。
　　2.ACE2+/+肺成纖維細胞自噬水平增高，減輕AngⅡ誘導的膠原和NOX4水平，A779和自噬抑制劑逆轉(zhuǎn)上述作用。
　　3.ACE2+/