Mfn2在氫氣鹽水抗肝臟缺血再灌注損傷中的作用和機(jī)制.pdf

1、目的：
　　利用大鼠肝臟部分缺血再灌注損傷模型，觀察氫氣鹽水對(duì)肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，從分子水平和超微結(jié)構(gòu)上研究肝缺血再灌注損傷和線粒體損傷的關(guān)系，并探討其可能的機(jī)制，為臨床肝臟外科手術(shù)后缺血再灌注損傷的防護(hù)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　將健康雄性SD大鼠56只，隨機(jī)取8只為假手術(shù)組（N組），另48只隨機(jī)分為對(duì)照組（NS組）和實(shí)驗(yàn)組（HS組），其中再按缺血時(shí)間分為NS1組和HS1組（缺血20min），NS2組和H

2、S2組（缺血40min），NS3組和HS3組（60min），每組8只。假手術(shù)組術(shù)前10min腹腔注射生理鹽水10ml/kg，對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組術(shù)前10min分別腹腔注入生理鹽水10ml/kg、飽和氫氣鹽水10ml/kg。動(dòng)物模型為經(jīng)典肝臟缺血再灌注模型。分別以各組大鼠肝臟門靜脈復(fù)流后24h取肝臟標(biāo)本及靜脈血。
　　1.運(yùn)用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST水平。
　　2.病理切片觀察肝組織形態(tài)學(xué)改變及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　

3、3.透射電鏡觀察肝組織中線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)改變。
　　4.實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot檢測(cè)在肝組織中Mfn2表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠肝臟缺血20、40、60min恢復(fù)再灌注24h后，各組血清ALT、AST水平逐漸升高，以60min升高最明顯（P<0.01）。與NS組比較，相應(yīng)的HS組ALT、AST水平均明顯降低（P<0.05）。
　　2. HE染色生理 NS1、NS2組可見肝細(xì)胞明顯腫脹，脂肪

4、變性；NS3組可見少量肝細(xì)胞嗜酸性壞死及點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與 NS組比較，相應(yīng)的HS組肝臟細(xì)胞水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減輕。
　　3.透射電鏡可以看出NS1、NS2組缺血再灌注大鼠肝細(xì)胞部分線粒體腫脹，數(shù)量減少，線粒體嵴稍減少，少數(shù)線粒體膜不完整，基質(zhì)密度降低，NS3組則線粒體高度腫脹、形狀不規(guī)則，空泡形成，而且線粒體脊紊亂、短小，排列紊亂，甚至崩解，基質(zhì)凝聚。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張。而 HS組的大鼠肝細(xì)胞線粒體呈長(zhǎng)柱狀或

5、網(wǎng)狀，大小、形態(tài)較一致，線粒體膜完整，線粒體嵴呈板層狀分布、清晰可見，較規(guī)則，基質(zhì)結(jié)構(gòu)較清晰。
　　4. NS3組較N組Mfn2蛋白及mRNA表達(dá)量明顯降低（P<0.01）。HS組Mfn2蛋白及mRNA表達(dá)較相應(yīng)的NS組均有升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．氫氣鹽水對(duì)肝臟缺血再灌注的肝功能損害、肝組織及線粒體的功能形態(tài)有一定保護(hù)作用。
　　2．氫氣鹽水可促使Mfn2蛋白及RNA的表達(dá)上調(diào)，可能通過促進(jìn)線