氫氣鹽溶液在肝臟缺血再灌注損傷中保護(hù)作用的機(jī)制.pdf

1、研究目的：肝臟缺血再灌注損傷(hepatic ischemia-reperfusion injury，HIRI)是肝臟外科常見(jiàn)的問(wèn)題，可見(jiàn)于肝臟外傷、肝腫瘤切除術(shù)，肝移植及休克，感染等。HIRI的發(fā)生機(jī)理非常復(fù)雜，其確切機(jī)制目前尚不完全清楚，多數(shù)觀點(diǎn)認(rèn)為HIRI的損傷機(jī)制主要與氧自由基釋放、炎性細(xì)胞因子表達(dá)、鈣離子超載、微循環(huán)障礙、線粒體功能受損、能量代謝障礙等因素有關(guān)。肝臟作為機(jī)體重要的防御屏障，其功能的受損常常造成內(nèi)毒素血癥，后者反

2、過(guò)來(lái)又加重肝臟功能受損，形成惡性循環(huán)，造成嚴(yán)重的膿毒癥及多臟器功能衰竭甚至死亡。目前，國(guó)內(nèi)外研究所報(bào)道的肝臟缺血再灌注損傷的防護(hù)策略主要集中在抗氧化，抗炎等主要方面，因此，尋找特異性強(qiáng)、副反應(yīng)小、臨床應(yīng)用可能性大的抗氧化抗炎雙重效能的藥物，具有迫切的研究意義和潛在的臨床應(yīng)用前景。近期，有文獻(xiàn)指出氫分子具有選擇性抗氧化的生理特性，呼吸氫氣能顯著緩解肝，腦，腎臟等器官的缺血再灌注損傷。但是通過(guò)呼吸的方法不僅在氣體混合過(guò)程中存在爆炸的危險(xiǎn)，而

3、且需要比較特殊的設(shè)備，操作比較復(fù)雜，在臨床上難以推廣。經(jīng)過(guò)理論推算發(fā)現(xiàn)，將氫氣溶解在生理鹽水中，經(jīng)過(guò)加壓等特殊的處理，使其達(dá)到飽和溶解，可制造出氫的生理鹽水飽和溶液。本研究旨在研究氫氣鹽溶液在肝臟缺血再灌注損傷中的保護(hù)效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制。
　　 研究方法：①比較假手術(shù)、缺血再灌注、生理鹽水+缺血再灌注(對(duì)照組)和氫氣鹽溶液組+缺血再灌注組(治療組)之間血清中轉(zhuǎn)氨酶以及肝臟組織結(jié)構(gòu)變化的差異，以及各組的MDA含量的差異；②DAB免疫組

4、織化學(xué)染色的方法檢測(cè)氧自由基與細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)以及DNA反應(yīng)的產(chǎn)物羥基丙烯醛(HNE)以及8-羥基鳥(niǎo)嘌呤(8-OH-G)，比較各組之間陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的差異；③檢測(cè)肝臟缺血再灌注2，6，12，24小時(shí)肝組織炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-6 mRNA水平；利用Westernblot的方法分析肝內(nèi)和血清中內(nèi)源性損傷蛋白HMGB1的含量；檢測(cè)肝臟缺血再灌注損傷后內(nèi)源性損傷蛋白HMGB1在肝細(xì)胞中的定位，分析其與肝細(xì)胞氧化損傷之間的關(guān)聯(lián)。
　　 研

5、究結(jié)果：
　　 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究：①與對(duì)照組組大鼠相比，缺血前腹腔注射氫氣鹽溶液再灌注后2，6，12，24小時(shí)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平明顯降低(P＜0.05)，其中IRhy-2h降低38.0％，IRhy-6h小時(shí)降低44.0％，IRhy-12h降低56.5％，IRhy-24h降低74.8％；同時(shí)肝臟組織缺血再灌注6小時(shí)后HE染色結(jié)果顯示治療組無(wú)明顯細(xì)胞壞死以及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)；②與對(duì)照組比，缺血前腹腔注射氫氣鹽溶液再灌注后2，6，

6、12，24小時(shí)組織MDA含量也顯著降低(P＜0.05)，其中IRhy-2h降低31.2％，IRhy-6h小時(shí)降低42.8％，IRhy-12h降低48.3％，IRhy-24h降低70.5％；同時(shí)，治療組HNE和8-OH-G陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組顯著減少，P＜0.05。
　　 2.分子機(jī)制研究：①與對(duì)照組相比，治療組再灌注2，6，12，24小時(shí)肝組織中細(xì)胞因子TNF-a和IL-6 mRNA水平明顯降低，其中TNF-a水平在6h，12h，

7、24h分別較對(duì)照組降低25.6％，39.6％，54.6％，P＜0.05；IL-6水平在2h，6h，12h，24h分別下降44.6％，39.2％，40.2％，36.6％，P＜0.05；②氫氣鹽溶液組肝臟組織中HMGB1表達(dá)較對(duì)照組降低，P＜0.05，同時(shí)循環(huán)系統(tǒng)中的HMGB1含量也較對(duì)照組顯著降低，P＜0.05；另外，免疫組織化學(xué)顯示氫氣鹽溶液能抑制缺血再灌注誘導(dǎo)的HMGB1表達(dá)及釋放，僅有少量在胞漿及胞核表達(dá)HMGB1的陽(yáng)性細(xì)胞。