PDGF-BB調(diào)控的microRNAs在低切應(yīng)力誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells，ECs）與血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）之間的信息交流，在動脈粥樣硬化等心血管疾病發(fā)生和發(fā)展的過程中具有至關(guān)重要的作用，而血管重建（remodeling）是心血管疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)和基本的病理過程。本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果顯示，低切應(yīng)力（low shear stress，LowSS）誘導(dǎo)ECs合成和分泌多種生物活性物質(zhì)，其中包括血小板源

2、性生長因子（platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB），PDGF-BB通過旁分泌機(jī)制作用于VSMCs，調(diào)控其增殖功能，從而誘導(dǎo)血管重建的發(fā)生。
　　近來研究表明，部分microRNAs（miRs），如miR-1和miR-34a在心血管組織中特異性表達(dá)，并在心血管疾病發(fā)生發(fā)展過程中具有不可替代的作用。然而，miR-1和miR-34a是否參與上述過程及其機(jī)制目前尚不清楚?；诖?，本文探討了不同

3、切應(yīng)力條件下ECs合成分泌的PDGF-BB對 VSMCs的miRs表達(dá)的影響，以及在調(diào)控VSMCs增殖中的可能分子機(jī)制。
　　應(yīng)用細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)平行平板流動腔系統(tǒng)對與 VSMCs聯(lián)合培養(yǎng)的ECs施加15 dyn/cm2的正常切應(yīng)力（normal shear stress，NSS）和5 dyn/cm2的LowSS，加載時間為12 h；Western blotting檢測聯(lián)合培養(yǎng) VSMCs的細(xì)胞核增殖抗原（proliferating

4、cell nuclear antigen，PCNA）蛋白表達(dá)，以此反映細(xì)胞增殖能力；Real-time PCR檢測聯(lián)合培養(yǎng)ECs的PDGF-BB以及VSMCs的miR-1和miR-34a的表達(dá)變化；通過TargetScan、miRWalk等網(wǎng)站分別預(yù)測miR-1和miR-34a的下游靶蛋白；Western blotting檢測聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs的miR-1下游靶蛋白-鋅指轉(zhuǎn)錄因子4（kruppel-like factor4，Klf4）和

5、miR-34a的下游靶蛋白-叉頭蛋白家族轉(zhuǎn)錄因子J2（forkhead box j2，F(xiàn)oxj2）的表達(dá)變化；靜態(tài)條件下應(yīng)用PDGF-BB重組蛋白刺激體外培養(yǎng)的大鼠VSMCs12 h，Western blotting檢測Klf4、Foxj2和PCNA的表達(dá)變化，Real-time PCR檢測VSMCs的miR-1和miR-34a表達(dá)變化；最后通過轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，分別上調(diào)和抑制VSMCs的miR-1和miR-34a表達(dá)，Western blot

6、ting檢測相應(yīng)靶蛋白和PCNA的表達(dá)變化，驗(yàn)證miR-1對Klf4以及miR-34a對Foxj2的負(fù)調(diào)控作用。
　　結(jié)果顯示：①與 NSS相比，LowSS促進(jìn)了聯(lián)合培養(yǎng) ECs的PDGF-BB表達(dá)以及聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs的PCNA表達(dá)；② PDGF-BB重組蛋白刺激VSMCs，引起VSMCs的PCNA表達(dá)升高，促進(jìn)VSMCs增殖；③通過TargetScan和miRWalk等網(wǎng)站預(yù)測miR-1的下游靶蛋白為Klf4，miR-34a的

7、下游靶蛋白為Foxj2；④用PDGF-BB重組蛋白刺激VSMCs，VSMCs的miR-1表達(dá)顯著下調(diào)，Klf4表達(dá)升高；miR-34a表達(dá)顯著上升，F(xiàn)oxj2表達(dá)降低；⑤上調(diào)VSMCs的miR-1和miR-34a表達(dá)水平，Klf4和Foxj2的表達(dá)均降低，抑制 VSMCs的miR-1和miR-34a表達(dá)，Klf4和Foxj2的表達(dá)均上調(diào)，且PCNA的表達(dá)也發(fā)生相應(yīng)的變化；⑥與NSS相比，LowSS導(dǎo)致聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs的miR-1表達(dá)顯