2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究單核細胞趨化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)誘導血管平滑肌細胞增殖的機制;
  方法:1.MCP-1作用VSMCs24 h后,用NADPH氧化酶活性測定試劑盒檢測細胞內(nèi) NADPH氧化酶活性變化。2.MCP-1作用血管平滑肌細胞(VSMCs)不同時間后加入熒光探針DCFH-DA,用熒光顯微鏡測定細胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)

2、的含量變化。3.MCP-1作用VSMCs不同時間后Western blot檢測p-AKT、AKT蛋白表達情況。4.MCP-1處理細胞后用CCK-8試劑盒測定DPI和LY294002對VSMCs細胞活力的影響。5.構(gòu)建過表達 MCPIP1的血管平滑肌細胞模型(over expression-MCPIP1,oe-MCPIP1):用MCPIP1表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染VSMCs;用熒光顯微鏡觀察及Western blot檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)MCPIP1蛋

3、白表達情況,確定最佳轉(zhuǎn)染時間。6.,用100 ng/mL MCP-1作用oe-MCPIP1模型細胞24h,采用熒光顯微鏡細胞計數(shù)測定細胞數(shù)量變化;流式細胞術(shù)測定細胞周期變化;CCK-8試劑盒測定細胞活力變化;EDU試劑盒檢測DNA合成率的變化。
  結(jié)果:1.MCP-1處理VSMCs24 h后,NADPH氧化酶活性升高,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);2.熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS生成量:MCP-1作用VSMCs12

4、 h,24 h,48 h后,與對照組相比,ROS含量顯著上升(p<0.01),并在12 h,24 h,48 h三個時間形成平臺效應;3.MCP-1作用VSMCs15,30,60 min后與對照組相比p-AKT蛋白表達升高(p<0.05),作用15 min后p-AKT/AKT比值達到峰值(p<0.05),30和60 min時AKT蛋白仍有持續(xù)性的磷酸化(p<0.05)。4.MCP-1處理VSMCs24 h,并分別加入DPI、Ly29400

5、2后與MCP-1單獨作用組相比細胞活力顯著降低(p<0.05)。5.經(jīng)DNA測序和雙酶切鑒定,證明MCPIP1表達質(zhì)粒構(gòu)建成功。轉(zhuǎn)染MCPIP1表達質(zhì)粒48 h后,MCPIP1表達量達到峰值(p<0.05)。6.用MCP-1處理oe-MCPIP細胞后,與單獨MCP-1作用組相比,細胞數(shù)量顯著升高(p<0.05),細胞活力明顯上升(p<0.05),S期細胞百分比增多(p<0.05),DNA合成率顯著上升(p<0.05)。
  結(jié)論:

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