AMPK參與線粒體通路介導(dǎo)的氟致H9c2心肌細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　不同濃度氟化鈉（NaF）對(duì)H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行染毒培養(yǎng)，研究AMPK參與線粒體通路介導(dǎo)的氟對(duì)H9c2心肌細(xì)胞毒性損傷的機(jī)理。
　　方法：
　　H9c2心肌細(xì)胞經(jīng)不同濃度NaF作用48h和72h后，采用MTT法對(duì)細(xì)胞增殖進(jìn)行研究；運(yùn)用HE染色法觀察心肌細(xì)胞的形態(tài)變化；采用流式細(xì)胞術(shù)觀測(cè)氟對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位（ΔΨm）和細(xì)胞早期凋亡率的影響；實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)凋亡途徑（線粒體途徑）中的重要基因（caspas

2、e-3、caspase-9和Cyt c）以及AMPKα的mRNA表達(dá)量；Western blot法檢測(cè)AMPKα蛋白磷酸化表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，低劑量的氟對(duì)細(xì)胞的增殖沒有明顯影響，隨NaF濃度的逐漸增大，氟對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)，細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)較明顯的變化，細(xì)胞間的相互連接逐漸消失，細(xì)胞膜變得模糊不清。在20 mg/L NaF作用下，細(xì)胞核開始發(fā)生碎裂，胞核中染色質(zhì)聚集。在40mg/L NaF作用下，

3、細(xì)胞間連接幾乎完全喪失，細(xì)胞外觀形態(tài)扭曲，輪廓模糊；經(jīng)NaF作用后，心肌細(xì)胞JC-1探針綠色熒光呈上升趨勢(shì)，說明氟會(huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞ΔΨm下降；細(xì)胞早期凋亡率隨NaF濃度的增大也呈上升趨勢(shì)，與ΔΨm的變化共同說明氟會(huì)導(dǎo)致H9c2心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡；隨NaF劑量的增大，各實(shí)驗(yàn)組caspase-3、caspase-9和Cyt c mRNA表達(dá)量與正常對(duì)照組比較均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)；且心肌細(xì)胞AMPKαmRNA表達(dá)量逐漸增多；對(duì)照組心肌細(xì)胞p-AMPKα