脂多糖對(duì)人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞IL-6-STAT3信號(hào)通路的影響及意義.pdf

1、目的：
　　研究脂多糖(LPS)刺激能否誘導(dǎo)正常人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞(HIBECs)白細(xì)胞介素-6(IL-6)/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)信號(hào)通路的激活及對(duì)該信號(hào)通路下游因子c-Myc和髓樣細(xì)胞白血病-1(Mcl-1)表達(dá)的影響；探討LPS對(duì)HIBECs細(xì)胞增殖的影響及其可能存在的機(jī)制。
　　方法：
　　(1) HIBECs細(xì)胞常規(guī)體外培養(yǎng)，使用不同濃度的LPS(0、0.1、1、2、4、8μg/ml)分別刺激

2、該細(xì)胞，并分別作用24h、48h、72h，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)各濃度、各時(shí)間點(diǎn)IL-6的表達(dá)水平，確定LPS的最適刺激濃度及最佳處理時(shí)間，再以其進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；(2)用前述所測(cè)LPS刺激HIBECs細(xì)胞，并設(shè)立正常細(xì)胞對(duì)照組，Western blot檢測(cè)磷酸化的STAT3（p-STAT3)蛋白和STAT3蛋白表達(dá)情況，確定p-STAT3/STAT3蛋白比例，探討LPS能否激活I(lǐng)L-6/STAT3信號(hào)通路；(3)再以前述所測(cè)L

3、PS干預(yù)HIBECs細(xì)胞，同時(shí)設(shè)立正常細(xì)胞對(duì)照組，分別采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-qPCR)和Western blot測(cè)定c-Myc、Mcl-1的mRNA及蛋白表達(dá)水平，進(jìn)一步探討LPS刺激對(duì)IL-6/STAT3信號(hào)通路下游因子表達(dá)的影響；(4)用前述所測(cè)LPS刺激HIBECs細(xì)胞，同時(shí)設(shè)立正常細(xì)胞對(duì)照組及空白對(duì)照組，MTT測(cè)定細(xì)胞增殖率，探討LPS刺激對(duì)HIBECs細(xì)胞增殖的影響。(5)運(yùn)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行

4、統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　(1) ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：LPS刺激能夠促進(jìn)HIBECs細(xì)胞分泌IL-6，并呈一定的時(shí)效、量效關(guān)系。在一定范圍內(nèi)隨著LPS濃度的增加，IL-6的分泌逐漸增加，而且當(dāng)LPS濃度為4μg/ml(F=16.492，P?0.001)，刺激時(shí)間為24h時(shí)(F=17.763，P＜0.01)，IL-6的分泌量達(dá)最大，然后隨LPS濃度的升高，刺激時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降；(2) Western blot結(jié)果顯示：

5、與正常細(xì)胞對(duì)照組相比，LPS刺激組p-STAT3/STAT3蛋白比例明顯增高(t=6.022，P＜0.05)；(3) RT-qPCR結(jié)果顯示：使用LPS處理后，HIBECs細(xì)胞c-Myc mRNA和Mcl-1 mRNA的表達(dá)明顯上調(diào)，較對(duì)照組分別上升了約36倍(t=14.59，P＜0.01)和2.4倍(t=19.10，P＜0.01)；Western blot結(jié)果顯示：與正常細(xì)胞對(duì)照組相比，LPS處理組c-Myc蛋白(t=46.45，P＜