西格列汀對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞JNK信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:
　　1.探究二肽基肽酶IV（DDP-IV）抑制劑西格列汀對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡是否有保護(hù)作用。
　　2.檢測(cè)MAPK信號(hào)通路蛋白JNK的濃度變化，探究二肽基肽酶IV（DDP-IV）抑制劑西格列汀發(fā)揮作用的機(jī)制。
　　方法:
　　體外完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿培養(yǎng)皿70％-80%時(shí)換用無胎牛血清培養(yǎng)基，生長(zhǎng)24小時(shí)使細(xì)胞生長(zhǎng)同步化，之后進(jìn)行分組如下：
　?、耪?duì)照組

2、：低糖（5.5mmol/L）環(huán)境下培養(yǎng)；
　?、聘咛墙M：高糖（25mmol/L）環(huán)境下培養(yǎng)；
　?、俏鞲窳型「深A(yù)組：預(yù)先加入西格列汀處理1小時(shí)后轉(zhuǎn)移至高糖培養(yǎng)基下培養(yǎng)；
　　⑷JNK信號(hào)通路阻斷劑組：預(yù)先加入JNK信號(hào)通路的特異性阻斷劑SP600125處理1小時(shí)后將大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至高糖培養(yǎng)基下培養(yǎng)。
　　之后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞的凋亡程度，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞的JNK基因表達(dá)的水平，

3、Western Blot方法測(cè)定實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)磷酸化的JNK蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.流式細(xì)胞術(shù)示：與對(duì)照組相比，高糖組細(xì)胞凋亡明顯增多；與高糖組相比，西格列汀干預(yù)組和阻斷劑組細(xì)胞凋亡明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（P<0.05）。
　　2.RT-PCR結(jié)果示：與正常組相比，高糖組磷酸化的JNK顯著增高；與高糖組相比，西格列汀組、阻斷劑組磷酸化的JNK均顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（P<0.05）。