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文檔簡介
1、本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將AtPCS1和CYP78A5兩個(gè)目的基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿愈傷組織，并通過紫花苜蓿再生得到含有AtPCS1和CYP78A5目的基因的植株。再生植株具有富集重金屬和有機(jī)污染物的能力，可以用來修復(fù)復(fù)合污染的土壤。螯合肽合成酶基因AtPCS1是與重金屬富集相關(guān)的基因，細(xì)胞色素氧化酶基因CYP78A5是與有機(jī)物抗性、積累相關(guān)的基因。目前，國內(nèi)外尚未出現(xiàn)同時(shí)利用這兩個(gè)基因進(jìn)行土壤修復(fù)的報(bào)道。
實(shí)驗(yàn)構(gòu)建含有AtPCS1、
2、CYP78A5基因的植物雙元表達(dá)載體:用目的基因替換表達(dá)載體pBI121上的Gus基因，構(gòu)建P35S-AtPCS1(CYP78A5)-T35S表達(dá)盒，然后通過凍融法將表達(dá)載體pBI121-AtPCS1、pBI121-CYP78A5轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404中。
實(shí)驗(yàn)用含有AtPCS1、CYP78A5目的基因的農(nóng)桿菌浸染紫花苜蓿下胚軸，通過組織培養(yǎng)，篩選出抗性愈傷組織，并誘導(dǎo)生芽生根，構(gòu)建并優(yōu)化了適合“三得利”紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化再
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