白細(xì)胞介素17在人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、遷移及凋亡中的作用.pdf

1、目的:
　　視網(wǎng)膜新生血管一般是在視網(wǎng)膜大面積缺血、缺氧、視網(wǎng)膜微循環(huán)障礙的情況下發(fā)生。新生血管形成和滲漏導(dǎo)致的視網(wǎng)膜水腫、出血和脫離是多種致盲性眼病的原因。新生血管的形成與多種細(xì)胞因子相關(guān)，機(jī)制并未完全清楚。探索其可能的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的干預(yù)方法是當(dāng)前眼科學(xué)的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。白介素17（Interleukin17, IL-17）分子屬于前炎癥因子，是IL-17家族中的重要分子，在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、促進(jìn)炎癥因子分泌等方面發(fā)揮重要作用。以

2、往有研究認(rèn)為IL-17分子通過促進(jìn)腫瘤新生血管的發(fā)生，影響腫瘤的生長(zhǎng)及愈后。而IL-17在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生過程中的作用等方面報(bào)道不多。為驗(yàn)證IL-17分子在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生過程中的作用，本研究通過體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞（HREC），使用不同濃度的人重組 IL-17蛋白進(jìn)行干預(yù)，觀察不同濃度下IL-17對(duì)HREC增生、遷移以及凋亡的影響，并進(jìn)一步探討其具體作用機(jī)制，以期對(duì)視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)病機(jī)制以及為臨床探索新型治療靶點(diǎn)提供有益

3、的理論依據(jù)。
　　材料和方法:
　　1.體外培養(yǎng) HREC，并取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)HREC中IL-17受體（IL-17R）基因和蛋白水平的表達(dá)。
　　2.以濃度50、100、200、500μg/L的IL-17培養(yǎng)液干預(yù)HREC，采用細(xì)胞增生試劑盒-8（CCK-8）增生分析法檢測(cè)不同濃度IL-17對(duì)HREC細(xì)胞增生的作用。

4、>　　3.以濃度50、100、200、500μg/L的IL-17培養(yǎng)液干預(yù)HREC，采用細(xì)胞劃痕法測(cè)定不同濃度IL-17對(duì)HREC細(xì)胞遷移的影響。
　　4.以濃度200μg/L的IL-17培養(yǎng)液干預(yù)HREC，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)IL-17對(duì)HREC細(xì)胞凋亡的影響。
　　5.以1、2 mg/L的IL-17培養(yǎng)液干預(yù)HREC，應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)HREC中堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（C

5、aspase-3）、凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）的mRNA表達(dá)。
　　6.以1、2 mg/L的IL-17培養(yǎng)液干預(yù)HREC，Western blot檢測(cè)細(xì)胞中Caspase-3的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1. RT-PCR、Western blot檢測(cè)到HREC細(xì)胞中基因和蛋白水平IL-17R的表達(dá)。
　　2. CCK-8增生分析法結(jié)果顯示，隨著IL-17培養(yǎng)液的濃度不斷增加，A值呈上升趨勢(shì)。與對(duì)照組比較，

6、200、500μg/L干預(yù)組A值的升高差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-3.235、-6.276，P=0.032、0.000）。
　　3.細(xì)胞劃痕法檢測(cè)結(jié)果顯示，干預(yù)12、24 h時(shí)，100μg/L干預(yù)組（t=-3.551、-2.849，P=0.006、0.019）、200μg/L干預(yù)組（t=-10.347、-4.519，P=0.000、0.001）、500μg/L干預(yù)組（t=-3.541、-2.607，P=0.008，0.036）HRE

7、C遷移距離均明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.流式細(xì)胞技術(shù)檢查結(jié)果顯示，200μg/L干預(yù)組細(xì)胞凋亡比例較對(duì)照組明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.682，P=0.047）。
　　5. RT-PCR及瓊脂糖電泳結(jié)果顯示，經(jīng)IL-17干預(yù)后HREC中bFGF的mRNA表達(dá)水平呈升高趨勢(shì)，而Caspase-3和TSP-1的mRNA表達(dá)水平呈下調(diào)趨勢(shì)。
　　6. Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)IL-17干預(yù)后H