胰島素樣生長(zhǎng)因子1對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞作用和機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的：視網(wǎng)膜病變引起的視網(wǎng)膜新生血管由于與正常的血管在結(jié)構(gòu)、生長(zhǎng)位置、功能上均有不同，不僅不能為周圍組織有效地供氧，而且由于通透性等改變可破壞正常的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)，影響人的視覺(jué)功能。探索視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的干預(yù)方法是目前眼科學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)是一種活性蛋白多肽物質(zhì)，因其結(jié)構(gòu)與胰島素類似而得名，在促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂與分化成熟，及

2、創(chuàng)傷愈合等方面發(fā)揮重要作用。以往有研究認(rèn)為IGF-1通過(guò)與其受體IGF-1R結(jié)合后激活細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)信號(hào)通路發(fā)揮促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖及抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用，從而影響腫瘤的生長(zhǎng)及疾病預(yù)后。而關(guān)于IGF-1在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中的作用方面的研究報(bào)道較少。為探討IGF-1分子在視網(wǎng)膜新生血管發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及可能的機(jī)制，本研究通過(guò)含不同濃度IGF-1蛋白的培養(yǎng)基體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞（human retinal vascul

3、ar endothelial cells，HRECs），觀察不同濃度的IGF-1蛋白對(duì)HRECs遷移、凋亡及管腔形成能力的影響，并探討其對(duì)HRECs體外生物學(xué)作用的具體作用機(jī)制，以期對(duì)視網(wǎng)膜新生血管性疾病的發(fā)病機(jī)制以及為臨床研發(fā)新型治療靶點(diǎn)藥物提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.體外常規(guī)培養(yǎng)HRECs細(xì)胞系，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)HRECs中IGF-1受體（IGF

4、-1R）基因的表達(dá)情況。
　　2.以濃度分別為10、200ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預(yù)HRECs，應(yīng)用細(xì)胞劃痕法檢測(cè)不同濃度IGF-1對(duì)HRECs細(xì)胞遷移的影響。
　　3.以濃度分別為500、1000ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預(yù)HRECs，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)IGF-1對(duì)HRECs細(xì)胞凋亡的影響。
　　4.以濃度分別為10、100、200ng/ml的重組IGF-1蛋白培養(yǎng)液干預(yù)HRECs，應(yīng)用M

5、atrigel體外三維成型法檢測(cè)IGF-1對(duì)HRECs細(xì)胞管腔形成能力的影響。
　　5.以500、1000ng/ml的IGF-1培養(yǎng)液干預(yù)HRECs，應(yīng)用Realtime-PCR法檢測(cè)HRECs中血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB（PDGF-BB）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.HRECs細(xì)胞中存在IGF-1R的基因表達(dá)。
　　2.細(xì)胞劃痕法檢測(cè)結(jié)果顯示，

6、干預(yù)24h后，200ng/ml干預(yù)組（F=0.023,P=0.021）HRECs遷移的距離明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，1000ng/ml干預(yù)組（F=4.243，P=0.046）HRECs凋亡比例較對(duì)照組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.Matrigel體外三維成型法檢測(cè)結(jié)果顯示，干預(yù)12h后，200ng/ml干預(yù)組（F=0.26,P=0.048）細(xì)胞完整管腔形成的數(shù)量明顯增多，差異有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.Realtime-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)IGF-1干預(yù)后，1000ng/ml干預(yù)組HRECs中PDGF-BB（F=5.457,t=-3.489,P=0.025）基因表達(dá)水平顯著提高，Caspase-3（F=1.093,t=7.287，P=0.002）基因表達(dá)水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.IGF-1能促進(jìn)HRECs遷移、管腔形成能力，并抑制HRECs的凋亡。
　　2.其