整合素連接激酶在早期糖尿病腎病足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及大黃素對其的干預(yù).pdf

1、目的：
　　1.體內(nèi)外實(shí)驗觀察高糖環(huán)境下，足細(xì)胞極性標(biāo)志物desmin、nephrin的表達(dá)變化，探討高糖對足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（epithelial-to-mesenchymal transition, EMT）的影響；
　　2.體內(nèi)外實(shí)驗觀察足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程中整合素連接激酶（integrin linked kinase，ILK）的表達(dá)變化,ILK阻斷后足細(xì)胞EMT的抑制情況，探討ILK在足細(xì)胞EMT中的作用；
　　3.觀察

2、中藥單體大黃素對高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞EMT及ILK表達(dá)變化的影響，探討大黃素治療糖尿病腎病的機(jī)制。
　　方法：
　　細(xì)胞試驗：將條件性永生的小鼠足細(xì)胞隨機(jī)分為高糖組（HG）、正常對照組（NG）、HG+大黃素組30ug/ml，高糖刺激+ILK阻斷組（QLT0267）（1umol/l）干預(yù)組。采用免疫熒光、Western blot、real time RT-PCR檢測ILK、nephrin和desmin的表達(dá)變化，各項指標(biāo)間作相關(guān)分

3、析。
　　動物試驗：雄性健康SD大鼠, STZ造模成功后隨機(jī)分為下列幾組：①DM組：予等量生理鹽水灌胃；②DM+大黃素組:予灌胃大黃素20 mg·kg-1·d-1；③DM+ ILK阻斷組:腹腔注射QLT0267劑量10mg·kg-1·w-1；④正常對照組：每日給予等量生理鹽水。用藥12周取腎組織，免疫組化、Western blot及real time RT-PCR等方法檢測大足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物nephrin、desmin及ILK的

4、表達(dá)變化，與大鼠生化指標(biāo)及尿ACR做相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1.和正常糖組比較，高糖組足細(xì)胞desmin表達(dá)增加，nephrin表達(dá)減少，高糖組足細(xì)胞發(fā)生EMT；和正常對照組比較，DM組腎臟足細(xì)胞desmin表達(dá)增加，nephrin表達(dá)減少，DM鼠足細(xì)胞發(fā)生EMT，尿ACR增高。
　　2.高糖誘導(dǎo)EMT過程中ILK表達(dá)增加，阻斷ILK后高糖誘導(dǎo)EMT作用減弱； DM鼠腎臟足細(xì)胞ILK表達(dá)增加，ILK阻斷后足細(xì)胞EM