整合素連接激酶在非小細胞肺癌中的表達及意義.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文整合素連接激酶在非小細胞肺癌中的表達及意義姓名：余輝申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：張道榮2004030121采用鏈菌素抗生物素蛋白一過氧化物酶免疫組化法(S—P法)，檢測101例非小細胞肺癌組織，相應(yīng)正常肺組織的石蠟標(biāo)本中nK蛋白的表達。結(jié)果判定：每張切片在光鏡下隨機選取5個高倍視野。觀察陽性細胞染色強度；無染色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。0分為陰性，1分為弱陽性，2分為

2、陽性，3分為強陽性。22免疫印跡法：取在深凍冰箱中凍存的肺癌及正常的肺組織O125cm3大小各一塊復(fù)融后分別加入預(yù)冷并含蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液500ul，勻漿，超聲振蕩破碎細胞，混懸冰上靜置30mln后離心(10，000r／min，30nn)取上清，用酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度。用含SDS的樣品緩沖液調(diào)整各樣品總蛋白濃度為3mg／ml，100℃加熱5min后上樣，每泳道加樣品20ug。采用10％SDS—PAGE凝膠電泳，50V電壓下—個半小

3、時，根據(jù)m8矗一er位置，切取相應(yīng)的凝膠，電轉(zhuǎn)膜后將PYDF膜與一抗雜交，4℃孵育過夜(I％BSA將ILK一抗稀釋成2ug／m1)。二抗為堿性磷酸酶標(biāo)記的兔抗鼠免疫血清(1％BSAI：1000稀釋)，室溫孵育二小時，BCIP／NBT顯色3—5min。結(jié)果判定：在glla_rked“的60Kda附近出現(xiàn)的特異性條帶，用計算機圖像分析系統(tǒng)測定灰度值，來判斷ILK蛋白相對含量。3統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPsSforwindows100軟件，，用K丑

4、p】【an—Meiea法進行生存數(shù)據(jù)的分析，Log一刪Ill‘檢驗差異性，用Cox模型進行多因素分析。對扣醫(yī)表達與臨床病理特征的關(guān)系采用X2檢驗。將蛋白印跡結(jié)果的灰度值分為肺癌組和正常組進行配對t檢驗。PO05有顯著意義。實驗結(jié)果1免疫組織化學(xué)結(jié)果11ILK陽性染色定位及不同部位表達情況ILK在平滑肌細胞和纖維母細胞胞漿中呈陽性或強陽性表達，但我們在結(jié)果判定時并未把問質(zhì)的表達(無論正常組織或癌組織)計算在內(nèi)。在正常的支氣管粘膜上皮，Ⅱ型