牛蒡子中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的提取純化及體外活性研究.pdf

1、牛蒡子苷和牛蒡子苷元是牛蒡子中的主要有效生物活性成分，屬于木脂素類化合物，具有抗炎抑菌、抗氧化等生理活性。本文主要由三部分組成。
　　第一部分為牛蒡子中牛蒡子苷和牛蒡子苷元的提取工藝。
　　本文以乙醇為提取溶劑，選擇牛蒡子粉為實(shí)驗(yàn)藥材，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)分別考察了加熱回流法和微波輔助法兩種方法，優(yōu)化了提取牛蒡子苷和牛蒡子苷元以及水解牛蒡子苷制備牛蒡子苷元的工藝條件，利用高效液相色譜分析檢測(cè)目標(biāo)物的含量。
　　微波

2、輔助提取最佳工藝條件為：乙醇濃度40％，料液比1:15(g/mL)，提取功率500 W，提取時(shí)間200 s，提取3次。牛蒡子苷和牛蒡子苷元的得率分別為7.14%和0.53%，總得率為7.67%。經(jīng)二氯甲烷萃取后，牛蒡子苷和牛蒡子苷元的含量分別提高到25.93%和3.61%。加熱回流提取最佳工藝條件為：乙醇濃度50%，料液比1:30(g/mL)，提取時(shí)間0.5 h，提取1次。牛蒡子苷和牛蒡子苷元的得率分別為4.0%和0.44%，總得率為4

3、.44%。比較兩種提取工藝，微波輔助法優(yōu)于加熱回流法。
　　微波輔助水解最佳條件為：微波功率500 W，鹽酸濃度1 mol/L，料液比1:6(g/mL)，水解時(shí)間300 s，水解1次。牛蒡子苷的水解率為98.96%，牛蒡子苷元得率為1.80%。加熱回流水解最佳條件為：鹽酸濃度0.6 mol/L，料液比1:6(g/mL)，水解時(shí)間1 h，水解1次。牛蒡子苷的水解率為99.33%，牛蒡子苷元得率為1.81%。經(jīng)二氯甲烷萃取后，牛蒡子苷

4、元的含量提高到11.2%。結(jié)果表明，兩種水解工藝的效果均較好，但微波輔助法大大縮短了水解時(shí)間。
　　第二部分為牛蒡子苷和牛蒡子苷元的純化及結(jié)構(gòu)確認(rèn)。
　　本文利用高速逆流色譜法分離純化牛蒡子粗提物中的牛蒡子苷和牛蒡子苷元。純化牛蒡子苷的雙相溶劑體系為乙酸乙酯-乙醇-水（5:1:5，v/v），柱溫為20℃，流動(dòng)相的流速為1.5 ml/min，轉(zhuǎn)速為850 r/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。一次進(jìn)樣牛蒡子苷粗提物500 mg，純

5、化得到牛蒡子苷122.3 mg，提取率為94.3%，純度為98.46%。純化牛蒡子苷元的雙相溶劑體系為乙酸乙酯-正己烷-乙醇-水（4:4:3:4，v/v），柱溫為20℃，流動(dòng)相流速為1.5 ml/min，轉(zhuǎn)速為850 r/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。一次進(jìn)樣牛蒡子苷元粗提物500 mg，純化得到牛蒡子苷元45.7 mg，提取率為81.6%，純度為96.57%。通過熔點(diǎn)測(cè)定、質(zhì)譜、紅外、核磁共振碳譜和氫譜等表征手段對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確認(rèn)

6、。
　　第三部分為牛蒡子苷和牛蒡子苷元純品的體外活性研究。
　　本文研究了牛蒡子苷和牛蒡子苷元純品對(duì)DPPH自由基的清除作用。結(jié)果表明，牛蒡子苷對(duì)DPPH自由基的清除作用較弱；牛蒡子苷元對(duì)DPPH自由基的清除作用較好，牛蒡子苷元的EC50為0.016 mg/mL。并探討了牛蒡子苷和牛蒡子苷元純品對(duì)大腸桿菌、短小芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、沙門氏菌、藤黃微球菌六種細(xì)菌的抑菌作用，結(jié)果表明，牛蒡子苷和牛蒡子苷元體外對(duì)六種