牛蒡子質量評價及炮制過程化學成分變化規(guī)律研究.pdf

1、牛蒡子是一味臨床常用的中藥，主要產(chǎn)于吉林、遼寧、黑龍江、浙江等地區(qū)。目前，牛蒡子藥材及飲片的質量控制主要以木脂素類成分牛蒡苷和牛蒡苷元的含量為指標，忽視了牛蒡子中具有重要藥理活性的酚酸類成分，如綠原酸、異綠原酸A等。因此，研究建立牛蒡子多指標質量評價方法，采用多指標成分進行質量控制具有重要的意義。牛蒡子常炒制后使用，目前不同地方炮制規(guī)范中牛蒡子的炮制工藝尚不夠規(guī)范統(tǒng)一，存在微炒、炒黃和炒焦等幾種炮制工藝，炒制程度也有顯著差異。牛蒡子炮制

2、前后化學成分發(fā)生了復雜的變化，這些成分是如何變化的？其變化過程和變化規(guī)律是什么？還有待進一步研究闡明。
　　基于上述問題，本文對牛蒡子質量評價方法和炮制過程化學成分變化規(guī)律進行了系統(tǒng)研究，建立了牛蒡子質量評價方法，并闡明了牛蒡子炮制過程主要成分的變化規(guī)律。
　　本文在前期化學成分研究的基礎上，首先以牛蒡子中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷和牛蒡苷元等4個主要成分為質量評價指標，采用正交試驗法和響應面法兩種方法優(yōu)選牛蒡子超聲提取工藝

3、。結果顯示，不同工藝優(yōu)選方法確定的工藝條件相近。為了進一步比較超聲提取工藝和回流提取工藝的提取效果，本文又采用正交實驗法，對牛蒡子的回流提取工藝進行研究，建立了牛蒡子最佳回流提取工藝。結果發(fā)現(xiàn)，在回流提取和超聲提取過程中，粉碎粒度都是影響牛蒡子成分溶出的最重要因素，這說明牛蒡子在臨床使用過程中需破碎后使用具有一定的科學內(nèi)涵，符合古代炮制文獻和現(xiàn)代中藥飲片炮制規(guī)范對牛蒡子炮制后“用時搗碎”的要求。
　　在牛蒡子提取工藝研究的基礎上，

4、本文對不同產(chǎn)地牛蒡子進行質量評價研究，建立不同產(chǎn)地牛蒡子的定性定量評價方法。在定量分析研究中，采用HPLC法測定不同產(chǎn)地牛蒡子中牛蒡苷等4個主要成分的含量，通過對20批次樣品的測定結果進行分析，暫定牛蒡子中4個主要成分的質量控制標準為:綠原酸:1.50mg/g、異綠原酸A:1.00mg/g、牛蒡苷:50.0mg/g、牛蒡苷元:5.00mg/g。采用指紋圖譜技術聯(lián)合化學計量學方法，對不同產(chǎn)地牛蒡子進行定性分析。研究結果顯示，指紋圖譜技術結

5、合化學計量學方法可以有效的評價牛蒡子內(nèi)在質量，并且質量相似的聚在一起，為牛蒡子飲片的整體質量評價提供全面、客觀和準確的依據(jù)。
　　本文采用定性分析和定量分析相結合的方法，對牛蒡子炮制前后進行分析。在定量分析中，通過15批牛蒡子樣品分析顯示，牛蒡子炮制后綠原酸、異綠原酸A和牛蒡苷的含量降低，牛蒡苷元的含量升高。采用指紋圖譜技術結合化學計量學方法對炮制前后樣品進行定性分析后發(fā)現(xiàn)，牛蒡子炮制前后整體質量發(fā)生顯著差異，在聚類分析和主成分分

6、析中，炮制前后牛蒡子均可單獨聚為一類，含量不合格樣品可以被準確識別。由此可見，該方法可以準確的對牛蒡子生品及炮制品進行質量評價。在此基礎上，對牛蒡子炮制前后水煎液樣品中的主要成分進行含量分析，結果顯示，炮制后的水煎液中牛蒡苷的含量呈下降趨勢。綠原酸和異綠原酸A的含量也明顯降低，只有牛蒡苷元含量升高，且4個成分的總量下降。因此，傳統(tǒng)炮制理論認為牛蒡子炮制機理為“促進有效成分溶出”的解釋值得商榷。采用UPLC-QTOF-MS技術對牛蒡子炮制

7、前后的化學成分進行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)牛蒡子炮制前后化學成分發(fā)生復雜的變化，生品中檢測到18個成分，炮制品中檢測到21個成分，炮制過程中可能發(fā)生了成分分解、轉化反應。
　　在炮制前后變化研究的基礎上，本文對牛蒡子炮制過程中7個成分的含量變化進行過程分析。結果顯示，牛蒡子炮制過程中牛蒡苷的含量先略升高，后因受熱分解而含量降低，牛蒡苷元的含量升高，推測在炮制過程中牛蒡苷受熱分解生成牛蒡苷元。綠原酸和異綠原酸A含量均明顯下降，而咖啡酸的含

8、量顯著升高，推測在炮制過程中，這兩個成分受熱分解產(chǎn)生咖啡酸。因此，牛蒡子炮制過程中應嚴格控制炮制工藝，考慮到牛蒡苷元和咖啡酸具有顯著的藥理活性，在系統(tǒng)的比較研究的基礎上，建議牛蒡子在炮制過程中應控制藥材溫度在160℃左右，炒制時間在5-10min。為了進一步驗證牛蒡子炮制過程中主要成分的變化規(guī)律，本文對牛蒡子中綠原酸、異綠原酸A、牛蒡苷和牛蒡苷元等4個主要成分單獨受熱和混合受熱過程進行研究。結果顯示，上述4個成分混合加熱，可以提高分解效

9、率。說明牛蒡子炮制過程中化學成分變化是多成分綜合作用的結果，且酚酸類成分的存在可以加速牛蒡苷的分解。
　　本文對牛蒡子炮制過程脂肪油類成分進行研究。采用GC-MS法研究牛蒡子炮制過程中脂肪油類成分的變化，結果顯示，牛蒡子炮制過程中，脂肪油成分發(fā)生了顯著的變化。在180℃炮制過程中，共檢測到38個成分，其中生品檢測到21個成分，不同時間點炮制品中檢測到17個成分。炮制過程中，有21個成分消失，新生成了17個成分。由于牛蒡子具有潤腸通