牛蒡子葡萄糖苷酶生物轉化及其性質研究.pdf

1、牛蒡子中主要物質為牛蒡苷，而作為主要藥理活性物質的牛蒡苷元含量非常低，因此將牛蒡苷轉化為牛蒡苷元具有重要的應用價值。本研究利用源于牛蒡子的葡萄糖苷酶將牛蒡苷生物轉化為牛蒡苷元，并對牛蒡子葡萄糖苷酶的分離純化、酶學性質及其對槐角苷的生物轉化進行研究，主要研究結果如下：
　　利用牛蒡子所含的葡萄糖苷酶對牛蒡苷進行生物轉化。首先建立牛蒡苷元HPLC測定方法：流動相甲醇-水（1：1.1）；流速1.0mL/min；測定波長280nm；進樣量

2、10μL，在該測定方法下，牛蒡苷元測定的穩(wěn)定性、精密度和回收率分別為0.91％、0.52％和101.2％；其次，獲得了牛蒡苷元最優(yōu)提取條件：乙醇濃度50％、料液比1：10、提取時間16min，在該條件下，牛蒡苷元提取率達到9mg/g，較優(yōu)化前提高28.59％；最后確定牛蒡子葡萄糖苷酶生物轉化牛蒡苷的最優(yōu)時間為3min，轉化率達到90％以上，牛蒡苷元含量從7.10mg/g上升到41.53mg/g，進一步通過萃取、硅膠柱層析、乙醇結晶獲得牛

3、蒡苷元晶體，其純度達到98.50％，并對分離純化的牛蒡苷元進行了UV、IR、MS、NMR結構鑒定，證實分離純化產物為牛蒡苷元。
　　利用離子交換層析、疏水作用層析等方法從牛蒡子中分離純化得到電泳純的牛蒡子葡萄糖苷酶，收率為2.61％，純化倍數(shù)達到132倍，比酶活達到3.58U/mg。進一步研究發(fā)現(xiàn)，純化牛蒡子葡萄糖苷酶的最適溫度和pH值分別為55℃和6.0；Cu2+、Cd2+、Al3+和SDS對該酶酶活強烈抑制。
　　最后，

4、研究了純化牛蒡子葡萄糖苷酶對其它糖苷類物質的轉化能力。發(fā)現(xiàn)該糖苷酶可將槐角提取液中的染料木素鼠李糖基葡糖二苷水解成槐角苷，進而轉化為染料木素。轉化32 min后，槐角提取液中染料木素的生成量達到527.7 mg/L，是商業(yè)纖維素酶轉化效果的2倍，初步說明牛蒡子葡萄糖苷酶是一種廣譜性的高效糖苷酶。
　　通過上述研究，本論文成功建立了一種利用牛蒡子葡萄糖苷酶制備高純度牛蒡苷元的方法，同時也為牛蒡子葡萄糖苷酶在其它中藥生物轉化中奠定了應