抑癌基因PLCD1在結(jié)腸癌中的甲基化及其功能研究.pdf

1、目的：檢測PLCD1在結(jié)腸癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)及甲基化情況，檢驗(yàn)PLCD1在結(jié)腸癌中的抑癌作用并初步探討其抑癌機(jī)制。
　　方法：運(yùn)用免疫組化、RT-PCR檢測結(jié)腸癌組織及細(xì)胞中 PLCD1表達(dá)。采用MSP和BGS實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)腸癌細(xì)胞株中PLCD1甲基化情況。用去甲基化藥物（Aza+TSA）處理誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞株（HCT-15、Caco-2）,進(jìn)一步證實(shí) PLCD1表達(dá)缺失是因啟動子甲基化所致。構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)PLCD1的結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT

2、-15、Caco-2，通過一系列功能實(shí)驗(yàn)，如克隆形成實(shí)驗(yàn)、CCK8實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞技術(shù)，分析過表達(dá)PLCD1在體外對結(jié)腸癌增殖、遷移、侵襲、周期及凋亡的影響。利用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，觀察PLCD1對腫瘤生長的影響。運(yùn)用Western方法分析PLCD1對相關(guān)信號通路的影響，初步探討PLCD1發(fā)揮抑癌作用的可能分子機(jī)制。
　　結(jié)果： PLCD1基因啟動子區(qū)在53.8％（7/13）結(jié)腸癌細(xì)胞株中存在甲基化。選擇

3、PLCD1表達(dá)缺失的結(jié)腸癌細(xì)胞株 HCT-15，運(yùn)用去甲基化藥物Aza+TSA誘導(dǎo)處理后發(fā)現(xiàn)PLCD1重新表達(dá)。細(xì)胞株HCT-15、Caco-2重新表達(dá)PLCD1可以顯著抑制細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，促進(jìn)凋亡，使細(xì)胞周期阻滯于 G1期（P<0.001）。裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)顯示 PLCD1于體內(nèi)可明顯抑制結(jié)腸癌的生長（P<0.05）。Western結(jié)果發(fā)現(xiàn)PLCD1通過上調(diào)p53通路對細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響。
　　結(jié)論：在結(jié)腸癌中，PLCD1因啟動