骨質(zhì)疏松狀態(tài)下BMSCs成骨能力及與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的:
　　研究骨質(zhì)疏松狀態(tài)下成骨分化的能力及其調(diào)控基因。
　　材料與方法:
　　(1)骨質(zhì)疏松大鼠模型的建立及鑒定:取20只同批次，體重接近，健康狀態(tài)良好的3月齡雌性SD大鼠，隨機(jī)分為兩組，一組行去勢(shì)手術(shù)（OP組），另一組行假手術(shù)（NT組），手術(shù)3個(gè)月后，通過(guò)子宮體重比、血清學(xué)和Micro-CT影像學(xué)檢測(cè)對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行鑒定。
　　(2)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem

2、cells，BMSCs)的分離培養(yǎng)及鑒定:采用全細(xì)胞貼壁法分離、培養(yǎng)和純化BMSCs，觀察其細(xì)胞形態(tài)，并用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定。
　　(3) BMSCs成骨能力差異:成骨誘導(dǎo)后，測(cè)定兩組細(xì)胞堿性磷酸酶(AlkalinePhosPhatase，ALP)、骨鈣素(Osteocalcin，OC)在7d和14d時(shí)的表達(dá)差異，茜素紅染色檢測(cè)21天鈣結(jié)節(jié)形成差異。
　　(4)差異基因的篩選和鑒定:兩組BMSCs成骨誘導(dǎo)4天后，提取RN

3、A，通過(guò)基因芯片技術(shù)篩選出與核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor-κB，NF-κB)信號(hào)通路相關(guān)的表達(dá)差異基因，并用qRT-PCR進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果:
　　(1) OP組與NT組相比，血清雌二醇表達(dá)量下降20.09％(p＜0.05)，體重變化量上升67.65％(p＜0.05)，子宮體重比測(cè)量顯示:與NT組相比，OP組下降77.51％(p＜0.05)，Micro-CT檢測(cè)顯示:與NT組相比，OP組的骨小梁間隔減少，骨質(zhì)量

4、降低;骨密度（Bone mineral density, BMD）、骨體積分?jǐn)?shù)（Bone volume/Total volume，BV/TV）、骨小梁數(shù)目(Trabeculaenumber, Tb.N)分別減少45.64％、57.08％、60.88％(P＜0.05);骨小梁分離度(The Trabecular spacing，Tb.Sp)增加252.01％(P＜0.05);
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示，表面標(biāo)記物CD29和C

5、D90.1呈陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)率分別為100％和99.2％，CD45和CD11b/c呈陰性表達(dá)，表達(dá)率分別為2.9％和0.2％;
　　(3)相比于NT組，OP組BMSCs的ALP的7d和14d表達(dá)量分別降低46.73％、27.97％(P＜0.05);OC的7d和14d表達(dá)量分別降低34.63％、47.45％(P＜0.05);鈣結(jié)節(jié)形成數(shù)量，OP組均明顯小于NT組(P＜0.05);
　　(4)篩選出1435個(gè)表達(dá)量差異2倍以上的基

6、因，其中有7個(gè)與NF-KB信號(hào)通路相關(guān)的重要差異基因，RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示TRAF3、CXCL12、CXCR4、TNF-α、Bcl2a1、BCL-XL的表達(dá)量，NT組較OP組，分別高出80.00％、61.71％、72.81％、85.92％、87.19％、38.07％(P＜0.05)，而IL-1β的表達(dá)量，NT組較OP組降低69.62％(P＜0.05).
　　結(jié)論:
　　(1)大鼠去勢(shì)后，骨結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯改變，骨小梁明顯減少