過氧化物酶體增殖物活化受體-α啟動(dòng)子甲基化在非酒精性脂肪性肝炎的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　過氧化物酶體增殖物活化受體－α（Peroxisome proliferator-activated receptor-alpha，PPAR-α）屬于配體依賴型核受體，可促進(jìn)脂肪酸在線粒體的β氧化、減少肝臟脂肪沉積及炎癥因子的產(chǎn)生等對肝臟產(chǎn)生保護(hù)作用。相關(guān)研究表明當(dāng)正常肝臟組織發(fā)展為非酒精性脂肪性肝?。╪onacoholic fatty liver disease,NAFLD）時(shí)，PPAR-α的表達(dá)下調(diào)，且PP

2、AR-α的表達(dá)量與非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatophepatitis，NASH）的活動(dòng)分?jǐn)?shù)及胰島素抵抗呈負(fù)相關(guān)。我們前期研究表明脂聯(lián)素基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生甲基化可抑制該基因的表達(dá)，從而促進(jìn)NAFLD的發(fā)生。但目前為止，尚無相關(guān)文獻(xiàn)在人體從DNA啟動(dòng)子區(qū)甲基化的角度研究PPAR-α基因下調(diào)的原因。因此，我們開展此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步研究NASH患者PPAR-α表達(dá)下調(diào)是否因?yàn)樵摶騿?dòng)子區(qū)發(fā)生甲基化，明確PPAR-α啟動(dòng)

3、子甲基化在NASH進(jìn)程的作用機(jī)制。
　　方法：
　　肝臟標(biāo)本來源于廣州市第一人民醫(yī)院，HE染色明確病理分型，其中NASH患者15例及正常對照組11例。RT-PCR、Western Blotting、免疫組化方法分別檢測PPAR-αmRNA及蛋白的表達(dá)水平，選取其中的10對行焦磷酸測序檢測PPAR-α啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度，Pearson直線相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)PPAR-α啟動(dòng)子甲基化程度與蛋白表達(dá)的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　

4、1、HE染色后NASH組肝臟細(xì)胞內(nèi)可見明顯脂滴沉積、氣球樣變性、匯管區(qū)炎癥等。
　　2、NASH組與正常組選取病例的性別、年齡構(gòu)成無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹥0.05）。
　　3、RT-PCR、Western Blotting得出：NASH組 PPAR-αmRNA及蛋白表達(dá)較正常組均降低（P均﹤0.05），焦磷酸測序得出NASH組PPAR-α甲基化水平升高（P＜0.05）。免疫組化法示兩組PPAR-α蛋白表達(dá)量未見明顯差異（P﹥0.0

5、5）。
　　4、NASH組PPAR-α啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率較正常組升高。Person直線相關(guān)分析得出：PPAR-α甲基化程度與蛋白表達(dá)量呈明顯負(fù)相關(guān)(r=﹣0.878，|r|﹥0.6)， P＜0.01。
　　結(jié)論：
　　1、當(dāng)人體正常肝臟發(fā)展為NASH時(shí)，伴有PPAR-α的表達(dá)降低及啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度升高，PPAR-α甲基化程度與蛋白表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。
　　2、PPAR-α基因表達(dá)下調(diào)的可能原因之一是該基因啟動(dòng)子區(qū)