枯草芽孢桿菌拮抗菌株B29活性物質(zhì)形成條件研究及其抗菌蛋白的分離純化.pdf

1、枯草芽孢桿菌B29菌株對多種植物病原真菌具有拮抗作用。在使用NYD培養(yǎng)基對枯草芽孢桿菌B29菌株進行培養(yǎng)，并以黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)作為指示菌時，B29菌株產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為30℃；培養(yǎng)基初始pH值7.5；裝液量為250ml三角瓶裝液75ml培養(yǎng)基；培養(yǎng)時間為120h。此時B29菌株發(fā)酵上清液對黃瓜枯萎病菌的絕對抑菌率為42.43％。 使用硫酸銨對B29菌株發(fā)酵液中的蛋白類

2、物質(zhì)進行粗提，最佳硫酸銨飽和度為30％～70％。分離到的抗菌蛋白粗提物對熱具有一定的穩(wěn)定性；對蛋白酶K具有一定的耐受性，對胰蛋白酶和胃蛋白酶較為敏感。 B29菌株抗菌蛋白卡H提物經(jīng)DEAE-52離子交換層析和Bio-Gel P-100凝膠層析，得到一個拮抗活性峰。此活性峰經(jīng)C18反相HPLC柱檢測，抗菌蛋白B29I純度達97.81％。經(jīng)SDS-PAGE和IEF-PAGE電泳顯示為單一蛋白帶，分子量約為42.3KD，等電點為5.6

3、9。抗菌蛋白B29I對孢予萌發(fā)的抑制作用主要是可推遲黃瓜枯萎癇菌孢子萌發(fā)的時間，并可抑制芽管仲長，而且這種作用的效果較為強烈。 抗菌蛋白B291經(jīng)SDS-PAGE電泳后，交由軍事醫(yī)學科學院困家生物醫(yī)學分析中心進行膠內(nèi)酶切、肽段測序以及肽指紋圖譜的檢索。肽指紋圖譜經(jīng)檢索未得到匹配結(jié)果，初步判定該蛋白為一種新蛋白。并通過肽段序列測定得到3個肽段的序列，分別為：KTHVLEDEFK；KGYOTGDFGAYLH；RTYEVAEESPVL