枯草芽孢桿菌EB-28防治馬鈴薯晚疫病及其抗菌物質(zhì)研究.pdf

1、由致病疫霉（Phytophthora infestans）引起的馬鈴薯晚疫病，是制約馬鈴薯生產(chǎn)的一種重要病害。本研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌EB-28（Bacillus subtilis）具有作為生防菌株防治馬鈴薯晚疫病的潛力。
　　 枯草芽孢桿菌EB-28是由番茄植株中分離得到的對(duì)番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）具有抑菌作用的生防菌株。本研究分別測(cè)試了其菌懸液、無(wú)菌體培養(yǎng)液對(duì)馬鈴薯晚疫病菌游動(dòng)孢子釋放和孢子囊直接萌發(fā)

2、的抑菌能力。結(jié)果顯示，EB-28無(wú)菌體培養(yǎng)液對(duì)馬鈴薯晚疫病菌的游動(dòng)孢子釋放有強(qiáng)烈的抑制作用（抑菌率達(dá)到91.26％），但對(duì)病菌孢子囊萌發(fā)幾乎無(wú)抑制作用。
　　 通過(guò)在不同培養(yǎng)環(huán)境條件下，分別對(duì)EB-28菌株的菌量和其無(wú)菌體培養(yǎng)液對(duì)馬鈴薯晚疫病菌游動(dòng)孢子釋放的抑制率進(jìn)行測(cè)定，明確了EB-28菌株的最適培養(yǎng)條件。在黑麥培養(yǎng)基中,30℃、180 rpm、48 h時(shí)，其菌量能夠達(dá)到最高（108 cfu/mL）水平，同時(shí)其無(wú)菌體培養(yǎng)液對(duì)病

3、菌游動(dòng)孢子釋放的抑制率也達(dá)到最高的90.30％。結(jié)果顯示，最佳培養(yǎng)條件為30℃、pH7、48 h。
　　 試驗(yàn)分別測(cè)試了EB-28菌懸液及無(wú)菌體培養(yǎng)液在離體葉片與盆栽馬鈴薯上對(duì)馬鈴薯晚疫病的防治效果。結(jié)果顯示，EB-28菌懸液在盆栽植株試驗(yàn)中對(duì)馬鈴薯晚疫病的防效達(dá)到74.22％，顯著高于其在離體葉片上的防效55.68％。同時(shí)，其無(wú)菌體培養(yǎng)液的防效也分別達(dá)到了61.80％（盆栽試驗(yàn)）和60.54％（離體葉片試驗(yàn)）。
　　

4、以抗生素標(biāo)記的EB-28菌株回接到盆栽馬鈴薯葉片，測(cè)定其在馬鈴薯葉片上的定殖能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，接種3 d時(shí)，EB-28的菌量呈上升趨勢(shì)，并在第3 d達(dá)到最高（108 cfu/g），15 d后，菌量下降到103 cfu/g水平。同時(shí)，EB-28菌株對(duì)馬鈴薯晚疫病的防效，也表現(xiàn)出與菌量增減趨勢(shì)相同的變化。
　　 EB-28菌株無(wú)菌體培養(yǎng)液經(jīng)硫酸銨沉淀收集得到其蛋白粗提液，其中經(jīng)硫酸銨飽和度為30％-80％沉淀所得到的蛋白粗提液對(duì)馬

5、鈴薯晚疫病菌游動(dòng)孢子釋放具有強(qiáng)烈的抑制作用。進(jìn)一步研究顯示：蛋白粗提液的抑菌活性在40℃條件下處理20 min后與對(duì)照相比無(wú)顯著變化；經(jīng)60、80、100℃處理后，抑菌活性降低，但經(jīng)100℃處理20 min后，仍保持部分活性。在pH值為5-11范圍內(nèi)時(shí)，其抑菌活性略有變化，而當(dāng)pH為4時(shí)，其活性全部喪失。蛋白粗提液經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶k、部分有機(jī)溶劑和紫外線分別處理后，活性無(wú)顯著變化。經(jīng)SDS-PAGE不連續(xù)體系電泳，結(jié)果顯示這