側(cè)孢芽孢桿菌BL-1產(chǎn)抗菌物質(zhì)發(fā)酵條件的研究以及抗菌物質(zhì)的分離純化.pdf

1、側(cè)孢芽孢桿菌菌株BL-1是一株生防菌，一對煙草赤星、小麥赤霉以及稻瘟病菌等多種植物病原真菌具有抑菌作用。實驗證明側(cè)孢芽孢桿菌BL-1能夠產(chǎn)生抗菌蛋白，但由于其在普通培養(yǎng)液中的抗菌物質(zhì)產(chǎn)生水平較低，篩選BL-1菌株產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的適宜發(fā)酵培養(yǎng)基配方，優(yōu)化搖瓶發(fā)酵條件，提高其抗菌物質(zhì)產(chǎn)生水平，并分離純化出抗菌蛋白，可為明確其有效成分的氨基酸序列并對其抗菌物質(zhì)進行進一步的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。 通過單因子試驗對菌株BL-1產(chǎn)抗菌物質(zhì)的條件進行了

2、優(yōu)化，得到最優(yōu)的培養(yǎng)條件為，培養(yǎng)基初始pH值8.0、培養(yǎng)溫度30℃、裝液量90ml/250ml、轉(zhuǎn)速180r/min、發(fā)酵時間48h。通過單因子試驗方法對多個單因子進行篩選，明確了以葡萄糖作為碳源，以牛肉膏作為氮源最有利于抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生。加入NaCl和MnSO4可提高抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量。通過均勻設(shè)計試驗方法對上述4個單因子進行配方優(yōu)化篩選，建立了搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方篩選模型：Y=20.972+2.583X1-1.278X2-3.689X3-1

3、23.453X4-0.301X1-2+0.150X22+0.596X32+324.968X42據(jù)此模型推測出搖瓶發(fā)酵適宜培養(yǎng)基配方為：葡萄糖5.27(g/L)、牛肉膏13.10(g/L)、NaCl5.60(g/L)、MnSO4 0.35(g/L)。實驗證實此適宜配方的抑菌圈直徑實測值為31mm與理論值29.86mm偏差小于10％。證明模型是有效的。 菌株BL-1所產(chǎn)的抗菌物質(zhì)在45℃處理30 min后，抗菌活性顯著下降，表明該抗

4、菌物質(zhì)不耐高溫，對胰蛋白酶、蛋白酶K以及木瓜蛋白酶敏感，活性pH值范圍在6～8之間。通過硫酸銨分級鹽析條件的選擇，確定了利用70％飽和硫酸銨鹽析，獲得粗提蛋白的分離方法。采用抑菌活性檢測和SDS-PAGE跟蹤檢測，通過CM-Sepharose FF離子交換層析，Sephadex G25和Sephadex G50凝膠過濾柱層析等方法從菌株BL-1的發(fā)酵液中純化了抗菌蛋白，通過SDS-PAGE電泳分析，確定該蛋白質(zhì)的分子量為55kDa左右。