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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本研究通過觀察尼洛替尼(AMN107)聯(lián)合三氧化二砷(ATO)對(duì)慢性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞增殖及凋亡的影響,比較藥物干預(yù)前后BCR-ABL基因表達(dá)水平的變化,旨在探討兩藥是否具有協(xié)同作用,并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。為尋找慢性髓細(xì)胞白血病治療新方法提供理論基礎(chǔ)。
方法:
體外培養(yǎng)K562細(xì)胞,分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組只加培養(yǎng)基及細(xì)胞;實(shí)驗(yàn)組分為AMN107組、ATO組和AMN107+ATO組。用不同濃度的
2、AMN107(2.5、5.0、10.0μmol/L)、ATO(1.0、2.5、5.0μ-mol/L)和AMN107+ATO(選擇AMN107組和ATO組的最佳濃度)連續(xù)作用于K562細(xì)胞72h。MTT法檢測(cè)藥物對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物對(duì)K562細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響;RT-PCR檢測(cè)各組K562細(xì)胞BCR-ABL融合基因表達(dá)水平的變化。<
3、br> 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件spss13.0分析結(jié)果。
結(jié)果:
1、AMN107和ATO對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響
同一時(shí)間、不同濃度AMN107作用于K562細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨濃度的增加而逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一濃度、不同時(shí)間點(diǎn)AMN107作用于K562細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
同一時(shí)間、不同濃度ATO作用于K562細(xì)胞,細(xì)
4、胞生長(zhǎng)抑制率隨濃度的增加而逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一濃度、不同時(shí)間點(diǎn)ATO作用于K562細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
同一濃度,不同時(shí)間點(diǎn)的AMN107聯(lián)合ATO作用于K562細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加,較兩藥單獨(dú)應(yīng)用能更快達(dá)到IC50,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一時(shí)間點(diǎn),AMN107聯(lián)合ATO較兩藥單獨(dú)應(yīng)用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率更高,差
5、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2、AMN107和ATO對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響
1 umol/L ATO作用于K562細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組無明顯差異(P>0.05)。2.5umol/L和5umol/LATO作用于K562細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且細(xì)胞凋亡率隨濃度的增加而增加。
不同濃度AMN107作用于K562細(xì)胞,細(xì)胞凋亡率隨濃度的增加而逐
6、漸增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
AMN107聯(lián)合ATO組較兩藥單獨(dú)應(yīng)用細(xì)胞凋亡率更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3、ATO對(duì)K562細(xì)胞周期分布的影響
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期分布,結(jié)果顯示,不同濃度ATO作用于K562細(xì)胞后,停滯在G0/G1期的細(xì)胞比例隨藥物濃度的增加逐漸增加,S期、G2/M期細(xì)胞比例逐漸減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
4、AMN107和ATO對(duì)K
7、562細(xì)胞中BCR-ABL基因表達(dá)的影響
同一時(shí)間、不同濃度AMN107作用于K562細(xì)胞,BCR-ABL基因的表達(dá)水平隨藥物濃度的增加呈逐漸下降的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一濃度、不同時(shí)間點(diǎn)AMN107作用于K562細(xì)胞,BCR-ABL基因的表達(dá)水平隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸下降的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
同一時(shí)間、不同濃度ATO作用于K562細(xì)胞,BCR-ABL基因的表達(dá)水平隨藥物濃度的增
8、加呈逐漸下降的下降的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一濃度、不同時(shí)間點(diǎn)ATO作用于K562細(xì)胞,BCR-ABL基因的表達(dá)水平隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸下降的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
同一濃度,不同時(shí)間點(diǎn)AMN107聯(lián)合ATO作用于K562細(xì)胞,BCR-ABL基因的表達(dá)水平隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈逐漸下降的趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一時(shí)間點(diǎn),AMN107聯(lián)合ATO組能夠較兩藥單獨(dú)應(yīng)用更深的抑制BCR-AB
9、L基因的表達(dá)水平,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1、AMN107對(duì)K562細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用且呈時(shí)間與劑量依賴性,其機(jī)制可能與BCR-ABL基因表達(dá)下調(diào)有關(guān)。
2、ATO對(duì)K562細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用且呈時(shí)間與劑量依賴性,其機(jī)制可能與ATO促使停滯在G0/G1期的K562細(xì)胞比例增加,BCR-ABL基因表達(dá)下調(diào)有關(guān)。
3、AMN107與ATO兩者聯(lián)合作用于
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