抗痛風(fēng)中藥復(fù)方的優(yōu)選及其對高尿酸血癥小鼠XOD、ADA的影響.pdf

1、目的：痛風(fēng)是由尿酸鹽結(jié)晶沉積于關(guān)節(jié)組織內(nèi)及其周圍引起的一種慢性炎性風(fēng)濕病。臨床上以高尿酸血癥（hyperuricemia）、關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石（tophi）的沉積等為特征。高尿酸血癥被認(rèn)為是發(fā)展為痛風(fēng)的前提。當(dāng)血液中尿酸的濃度持續(xù)升高超過了其飽和狀態(tài)時(shí)就會有單鈉尿酸鹽晶體（monosodiumuratecrystal，MSU）形成，晶體逐漸沉積在體內(nèi)某些關(guān)節(jié)及組織就會發(fā)展為痛風(fēng)。痛風(fēng)若治療不及時(shí)最終會引起關(guān)節(jié)殘疾，影響人類健康，因此

2、對其治療至關(guān)重要。目前治療藥物主要有：別嘌呤醇、非布司他（抑制黃嘌呤氧化酶活性從而抑制尿酸合成）；苯溴馬隆、丙磺舒（促進(jìn)腎臟排泄尿酸）。這些藥物雖治療有效，但有效率未能達(dá)到人們的期望水平,且應(yīng)用過程中會帶來一些副作用，甚至危及生命。中醫(yī)將痛風(fēng)歸于“痹癥”的范疇，對痛風(fēng)的認(rèn)識歷史悠久。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步、研究的逐步深入，中醫(yī)中藥對痛風(fēng)的治療取得了顯著的療效。本文擬在建立可靠高尿酸血癥小鼠模型的基礎(chǔ)上，篩選出具有降尿酸作用的中藥，利用正交設(shè)

3、計(jì)選出中藥復(fù)方降尿酸的最優(yōu)劑量配伍組合，并進(jìn)一步證實(shí)其對高尿酸血癥小鼠的降尿酸作用，初步探討其作用機(jī)制，為臨床上治療痛風(fēng)提供更多的用藥依據(jù)。
　　方法：
　　1、急性高尿酸血癥小鼠模型的建立
　　昆明小鼠隨機(jī)分成3組，每組分別給予氧嗪酸鉀鹽腹腔注射、次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)合氧嗪酸鉀鹽皮下注射、生理鹽水腹腔注射后，留取血清按試劑盒步驟說明檢測血清尿酸水平。
　　2、具有降尿酸作用的單味中藥的篩選
　　2.1昆明小

4、鼠隨機(jī)分為正常對照(Control)、模型(Model)、別嘌呤醇（Allopurinol）、黃芪（Astragalus）、黃連（Coptischinensis）、薏苡仁（Semencoicis）、白芍（Radixpaeoniaealba）、青風(fēng)藤（Sinomeniumacutum）組（每組各8只），中藥各組、別嘌呤醇組每只小鼠均給予對應(yīng)藥物灌胃，模型組及正常對照組給予相同體積生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃7d，末次給藥后中藥各組、別嘌呤醇組、

5、模型組小鼠給予500mg/Kg次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)合400mg/Kg氧嗪酸鉀皮下注射造模。采集血清按試劑盒步驟說明檢測血清尿酸水平。
　　2.2昆明小鼠隨機(jī)分為正常對照(Control)、模型(Model)、別嘌呤醇（Allopurinol）、連翹（Forsythia）、金銀花（Honeysuckle）、黃芩（Scutellaria）、山慈菇（Cremastraappendiculata）、茵陳蒿（Capillaryartemisi

6、a）、澤瀉（Rhizomaalismatis）、蒼術(shù)（Rhizomaatractylodis）組（每組各7只），中藥各組、別嘌呤醇組每只小鼠均給予對應(yīng)藥物灌胃，模型組及正常組給予相同體積的生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃7d，末次給藥后中藥各組、別嘌呤醇組、模型組小鼠給予500mg/Kg次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)合400mg/Kg氧嗪酸鉀皮下注射造模。采集血清按試劑盒步驟說明檢測血清尿酸水平。
　　3、中藥復(fù)方降尿酸最優(yōu)劑量配伍組合的篩選
　

7、　3.1中藥復(fù)方降尿酸最優(yōu)劑量配伍組合的篩選
　　嚴(yán)格按照正交設(shè)計(jì)的安排將昆明小鼠隨機(jī)分成9組，每組7只，同時(shí)設(shè)立模型組及正常對照組驗(yàn)證模型，9組小鼠均給予對應(yīng)藥物灌胃，模型組及正常對照組給予相同體積生理鹽水灌胃，灌胃給藥7d，末次給藥后各中藥復(fù)方組、模型組分別給予500mg/Kg次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)400mg/Kg氧嗪酸鉀皮下注射造模。采集血清按試劑盒步驟說明檢測血清尿酸水平。
　　3.2中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組合的驗(yàn)證
　

8、　昆明小鼠隨機(jī)分為中藥復(fù)方高劑量組、中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組、中藥復(fù)方低劑量組、模型組、正常對照組（每組各7只）；中藥各組每只小鼠均給予對應(yīng)藥物灌胃，模型組及正常對照組給予相同體積生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃7d，末次給藥后中藥復(fù)方各劑量組、模型組小鼠給予500mg/Kg次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)合400mg/Kg氧嗪酸鉀皮下注射造模。采集血清采用試劑盒檢測方法檢測血清尿酸水平。
　　4、中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組合降尿酸作用的機(jī)制研究
　　昆明小鼠隨

9、機(jī)分為中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組、正常對照組、模型組、別嘌呤醇組（每組各7只）；中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組、別嘌呤醇組每只小鼠均給予對應(yīng)藥物灌胃，模型組及正常對照組給予同等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)灌胃7d，末次給藥后中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組、別嘌呤醇組、模型組小鼠給予500mg/Kg次黃嘌呤腹腔注射聯(lián)合400mg/Kg氧嗪酸鉀皮下注射造模。造模后小鼠摘眼球取血，采集血清采用酶比色法檢測血清尿酸水平，比色法檢測血清黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）活性

10、；解剖小鼠肝臟，采用比色法檢測肝臟組織黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）活性。
　　結(jié)果：
　　1、急性高尿酸血癥小鼠模型的建立
　　三組血尿酸水平有差異（P<0.05）；次黃嘌呤聯(lián)合氧嗪酸鉀組血尿酸水平顯著高于正常對照組（P<0.05）；氧嗪酸鉀組與正常對照組血尿酸水平比較無明顯差異（P>0.05）。
　　2、具有降尿酸作用的單味中藥的篩選
　　模型組血尿酸水平明顯升高，與正常對照組相比有差異（

11、P<0.05）,說明造模成功；薏苡仁組、連翹組、蒼術(shù)組、別嘌呤醇組血尿酸值明顯低于模型組（P<0.05）；黃芪、黃連、青風(fēng)藤、白芍各組與模型組相比血尿酸無差異（P>0.05）；金銀花、黃芩、茵陳、山慈菇、澤瀉各組與模型組相比，血尿酸值無明顯變化（P>0.05）；薏苡仁組與黃芪、黃連、青風(fēng)藤、白芍各組相比血尿酸水平明顯下降（P<0.05）；連翹組、蒼術(shù)組與金銀花、黃芩、茵陳蒿、山慈菇、澤瀉各組相比血尿酸水平明顯下降（P<0.05）；薏苡仁

12、組、連翹組、蒼術(shù)組血尿酸水平高于別嘌呤醇組（P<0.05）。
　　3、中藥復(fù)方降尿酸最優(yōu)劑量配伍組合的篩選
　　3.1中藥復(fù)方降尿酸最優(yōu)劑量配伍組合的篩選
　　通過正交設(shè)計(jì)篩選出的3種中藥最優(yōu)劑量配伍組合為：薏苡仁（4g/Kg），連翹（4g/Kg），蒼術(shù)（2.5g/Kg），此時(shí)降尿酸作用最佳。
　　3.2中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組合的驗(yàn)證
　　中藥復(fù)方高、最優(yōu)、低劑量組血尿酸值明顯低于模型組（P<0.05）；中藥復(fù)

13、方高、最優(yōu)、低劑量組間血尿酸水平有明顯差異（P<0.05）；中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組血尿酸水平下降最明顯，與中藥復(fù)方高、低劑量組相比有差異（P<0.05），與正交設(shè)計(jì)階段各組血尿酸相比明顯下降，說明采用此劑量組合較穩(wěn)定。
　　4、中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組合降尿酸作用的機(jī)制研究
　　模型組血尿酸值明顯高于正常對照組（P<0.05）；中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組、別嘌呤醇組血尿酸水平明顯下降，與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；模型組肝臟組織X

14、OD、ADA活性及血清XOD、ADA活性明顯高于正常對照組（P<0.05）；中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組較模型組肝臟組織XOD、ADA活性及血清XOD、ADA活性下降明顯（P<0.05）；別嘌呤醇組較模型組肝臟組織XOD、ADA活性及血清XOD、ADA明顯下降（P<0.05）；中藥復(fù)方最優(yōu)劑量組肝臟組織XOD、ADA活性及血清XOD、ADA活性較別嘌呤醇組偏高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、按次黃嘌呤500