粘紅酵母木糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的研究.pdf

1、隨著現(xiàn)在生物能源產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)入非糧時(shí)代，纖維素、半纖維素利用問(wèn)題是解決原料成本上的一個(gè)技術(shù)難題，纖維素預(yù)處理以及水解產(chǎn)物中木糖等五碳糖的利用問(wèn)題是其中的關(guān)鍵，利用分子生物學(xué)技術(shù)手段，拓展傳統(tǒng)油脂微生物的木糖利用效率，以最終實(shí)現(xiàn)木質(zhì)纖維素為原料發(fā)酵生產(chǎn)微生物油脂，是隨著生物柴油技術(shù)成熟推廣應(yīng)用而備受關(guān)注的問(wèn)題。
　　 本課題主要研究了產(chǎn)油酵母—粘紅酵母木糖利用過(guò)程中介導(dǎo)五碳糖特異性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)理研究。首先，本文考察了已報(bào)道的假絲酵母木糖

2、特異性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在粘紅酵母中的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)中首先構(gòu)建了適用于粘紅酵母外源基因表達(dá)用的質(zhì)粒載體，在原有質(zhì)?；A(chǔ)上添加了適用于粘紅酵母基因工程篩選用的博來(lái)霉素抗性基因(shble)，同時(shí)添加了適用于粘紅酵母表達(dá)外源基因的多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建了粘紅酵母游離型表達(dá)載體PRS424-Phxt7-GFP-Thxt7-shble，對(duì)于粘紅酵母后期整個(gè)分子生物學(xué)的研究具有很強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。
　　 在構(gòu)建好的載體PRS424-Phxt7-GFP-Thx

3、t7-shble上成功的連接了已報(bào)道的假絲酵母木糖特異性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)基因GXS1(GlucoseXylose Symporter)，通過(guò)對(duì)原始菌與重組菌木糖發(fā)酵過(guò)程中對(duì)木糖濃度的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)重組菌對(duì)木糖的吸收利用效率高于原始菌，重組菌在發(fā)酵80小時(shí)左右木糖消耗完，同比原始菌則需要在120h左右才能將木糖利用完。說(shuō)明重組菌中表達(dá)的木糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白能夠有效地介導(dǎo)木糖的胞外到胞內(nèi)的運(yùn)輸。
　　 本文嘗試憑借反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，染色體步移技術(shù)，