大腸癌腫瘤微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細胞通過下調(diào)microRNA-195-5p靶向調(diào)控MAGE的表達.pdf

1、已有大量的研究證據(jù)證明在惡性腫瘤微環(huán)境（TME）中M2型巨噬細胞的含量表現(xiàn)為明顯升高，在癌癥組織中，腫瘤相關(guān)巨噬細胞被招募到腫瘤細胞分泌的細胞因子的腫瘤間質(zhì)中來，從而促進腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，而腫瘤間質(zhì)正是構(gòu)成腫瘤微環(huán)境的主要組成成分。在這項研究中，我們側(cè)重于研究TME中免疫細胞中的M2巨噬細胞在結(jié)腸腫瘤間質(zhì)中作用于 microRNA-195-5p的這一過程。首先研究microRNA-195-5p以及其靶基因MAGE的作用機理，先建立一

2、個共培養(yǎng)體系使THP-1轉(zhuǎn)化為M2的巨噬細胞。方法是從培養(yǎng)的結(jié)腸癌細胞（LoVo細胞株）提取培養(yǎng)基上清液，用佛波酯（PMA，美國sigma公司產(chǎn)）和LoVo上清液一起刺激THP-1細胞轉(zhuǎn)化為M2型巨噬細胞；第二步驗證轉(zhuǎn)化好的巨噬細胞表型，方法為：ELISA和流式細胞術(shù)測定特定的細胞因子表達；第三步：提取M2巨噬細胞中miR-195-5p用RT-PCR和免疫印跡證實了 miR-195下調(diào)，同時它的靶蛋白 MAGE升高，接下來，transw

3、ell侵襲試驗表明，LoVo細胞及巨噬細胞共培養(yǎng)后上調(diào)和下調(diào)巨噬細胞內(nèi)miR-195-5p，分別可以使LoVo細胞侵襲能力下降和上升。
　　結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，近年來隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。目前結(jié)腸癌的早期診斷仍然比較困難，多數(shù)患者診斷時己有遠處轉(zhuǎn)移?，F(xiàn)今腫瘤微環(huán)境對腫瘤的影響成為新的研究熱點，而腫瘤相關(guān)巨噬細胞(tumor associated macrophage，TA

4、M)作為其中重要組成成分，在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用尤為突出。
　　腫瘤相關(guān)巨噬細胞位于腫瘤間質(zhì)，它可以通過產(chǎn)生細胞因子或直接調(diào)控基因及靶蛋白作用于腫瘤細胞，從而改變惡性腫瘤的生長、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性。既往研究中發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)巨噬細胞與大多數(shù)癌癥都密切相關(guān)，同時，它的浸潤程度與這些腫瘤患者的預(yù)后呈負相關(guān)。本研究通過建立上述共培養(yǎng)體系并檢測微小RNA-195-5p的變化，探討腫瘤相關(guān)巨噬細胞對結(jié)腸癌生物學(xué)行為的影響。