EB病毒相關(guān)胃癌腫瘤局部免疫與腫瘤細(xì)胞凋亡.pdf

1、EB病毒為自然界廣泛存在的皰疹病毒科DNA致瘤病毒，人群感染率高達(dá)90％以上，是傳染性單核細(xì)胞增多癥的病原體，同時與某些人類惡性腫瘤如鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)、Burkitt's淋巴瘤(BL)、霍奇金淋巴瘤以及免疫缺陷病人淋巴瘤等的發(fā)生密切相關(guān)。近三十年來研究表明，世界范圍內(nèi)約1.3-18％的胃癌與EBV感染密切相關(guān)，這部分胃癌稱為EB病毒相關(guān)胃癌。
　　 EBVaGC具有獨(dú)特的臨床病理

2、特征，然而關(guān)于EBVaGC的預(yù)后意見不一。目前認(rèn)為腫瘤的預(yù)后同時取決于腫瘤本身的惡性程度和宿主免疫系統(tǒng)的抵抗作用。因此，研究EBVaGC患者的腫瘤免疫狀態(tài)有助于我們進(jìn)一步理解EBVaGCC的生物學(xué)行為和臨床病理特征，為EBVaGC免疫治療提供理論依據(jù)。
　　 腫瘤免疫可分為全身免疫和局部免疫。腫瘤局部免疫作為腫瘤與機(jī)體作用的主要部位，在患者體內(nèi)處于機(jī)體免疫系統(tǒng)與腫瘤相互作用的最前沿，一定程度上反映機(jī)體抗腫瘤反應(yīng)的強(qiáng)度和總體水平。

3、腫瘤在機(jī)體的免疫監(jiān)視下生長，在腫瘤局部存在機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)和腫瘤微環(huán)境免疫抑制作用。研究表明，惡性腫瘤患者局部免疫學(xué)的改變與腫瘤的演變與病程密切相關(guān)，患者的免疫功能由早期的活躍狀態(tài)發(fā)展到不同程度的免疫抑制，病期越晚，免疫抑制越強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)，與EBV密切相關(guān)的鼻咽癌患者外周血的免疫反應(yīng)可被激活，而腫瘤局部免疫狀態(tài)受到抑制，因此推測腫瘤局部免疫狀態(tài)受到抑制而非全身免疫缺陷可能是鼻咽癌的發(fā)病機(jī)制之一。那么同為上皮性腫瘤的EBVaGC的腫瘤局

4、部免疫狀態(tài)怎樣?是否存在免疫抑制?
　　 EBVaGC組織中有明顯的淋巴細(xì)胞浸潤傾向，而對于EBVaGC中腫瘤浸潤免疫細(xì)胞的亞型及其在腫瘤免疫中的作用研究較少。目前僅有4篇文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤免疫細(xì)胞多數(shù)為具有增殖活性的CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞，但未見有關(guān)EBVaGC腫瘤局部免疫抑制因素的研究。
　　 我們課題組共收集了676例普通胃癌和26例殘胃癌手術(shù)切除標(biāo)本，用EBER原位雜交方法分別篩選出46例(6.8％)和8例(34.

5、6％)EBVaGC，并對EBVaGC的臨床病理特征和潛伏類型進(jìn)行了研究；本課題擬在此基礎(chǔ)上，采用免疫組化方法及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)核苷酸缺口標(biāo)記技術(shù)(Tdt-mediated-dUTP nickend labeling，TUNEL)研究EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)及其與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系。
　　 本課題分為以下二部分：
　　 第一部分普通胃癌中EB病毒相關(guān)胃癌腫瘤局部免疫與腫瘤細(xì)胞凋亡
　　 目的：<

6、br>　　 1.研究普通胃癌中EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)。
　　 2.探討普通胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系。
　　 材料和方法：
　　 1.采用免疫組化方法檢測普通胃癌EBVaGC中CD3、CD79α、CD56、Fascin標(biāo)記的TIL-T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞，并對CD3+TIL-T細(xì)胞進(jìn)行CD4和CD8亞群分析。
　　 2.采用免疫組化方法檢測Ki

7、67、IL-1β、顆粒酶B、FasL、IFN-γ/TNF-α在普通胃癌EBVaGC中CD8+T細(xì)胞的表達(dá)，研究CD8+T細(xì)胞數(shù)量增多的原因和功能狀態(tài)。
　　 3.采用TUNEL技術(shù)檢測普通胃癌EBVaGC腫瘤細(xì)胞的凋亡，并通過免疫組化方法檢測IL-10、FoxP3、Survivin、NF-κBp65、FasL在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)，探討普通胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　

8、 1.普通胃癌EBVaGC中的CD3+TIL-T細(xì)胞、CD79α+B細(xì)胞和CD56+NK細(xì)胞數(shù)量均比EBVnGC多(P＜0.001，P=0.003，P=0.04)，腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞主要為CD3+TIL-T細(xì)胞。EBVaGC中CD8+T細(xì)胞的數(shù)量比EBVnGC多(P＜0.001)，而CD4+T細(xì)胞數(shù)量兩組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。EBVaGC中CD3+TIL-T細(xì)胞多數(shù)為CD8+T細(xì)胞。EBVaGC中CD4/CD8比值明顯低于

9、EBVnGC組(P=0.004)。EBVaGC中的Fascin+的樹突細(xì)胞數(shù)量、FoxP3+的CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量均比EBVnGC多(P=0.012，P=0.033)。
　　 2.普通胃癌EBVaGC中Ki67、IL-1β、Granzyme B、IFN-γ陽性的CD8+T細(xì)胞百分率均比EBVnGC中高(P=0.001，P=0.038，P=0.003，P＜0.001)。而FasL蛋白在CD8+T細(xì)胞的陽性表達(dá)率和TN

10、F-α平均陽性CD8+T細(xì)胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均＞0.05)。EBVaGC中的IL-10平均陽性淋巴細(xì)胞百分率比EBVnGC中高(P=0.004)。
　　 3.普通胃癌EBVaGC的腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)低于EBVnGC腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)(P=0.013)。Survivin、NF-κBp65、FasL在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度均比EBVnGC中高(P=0.034，P=0.012，P=0.03)，Su

11、rvivin與LMP2A、NF-κBp65與LMP2A、Survivin與NF-κBp65在EBVaGC中腫瘤細(xì)胞的表達(dá)均有關(guān)聯(lián)性。EBVaGC中的腫瘤細(xì)胞IFN-γ、IL-1β、IL-10平均陽性細(xì)胞百分率均比EBVnGC中高(P＜0.001，P=0.026，P=0.001)，而TNF-α每高倍視野內(nèi)TNF-α平均陽性腫瘤細(xì)胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1

12、.在EBVaGC腫瘤局部免疫中存在免疫激活和免疫抑制兩方面的作用，在進(jìn)展期EBVaGC中免疫抑制作用可能更明顯。
　　 2.EBVaGC中腫瘤細(xì)胞凋亡減少可能是由于：a.進(jìn)展期EBVaGC中腫瘤免疫抑制作用可能更明顯；b.EBV編碼的蛋白LMP2A有可能通過上調(diào)Survivin的表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。
　　 第二部分殘胃癌中EB病毒相關(guān)胃癌腫瘤局部免疫與腫瘤細(xì)胞凋亡
　　 目的：
　　 1.研究殘胃癌E

13、BVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)。
　　 2.探討殘胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系。
　　 材料和方法：
　　 1.采用免疫組化方法檢測殘胃癌EBVaGC中CD3、CD79α、CD56、Fascin標(biāo)記的TIL-T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞，并對CD3+TIL-T進(jìn)行CD4和CD8亞群分析。
　　 2.采用免疫組化方法檢測Ki67、IL-1β、顆粒酶B、FasL、IF

14、N-γ/TNF-α在殘胃癌EBVaGC中CD8+T細(xì)胞的表達(dá)，研究CD8+T細(xì)胞數(shù)量增多的原因和功能狀態(tài)。
　　 3.采用TUNEL技術(shù)檢測殘胃癌EBVaGC腫瘤細(xì)胞的凋亡，并通過免疫組化方法檢測IL-10、FoxP3、Survivin、NF-κBp65、FasL在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)，探討殘胃癌EBVaGC組織中的腫瘤局部免疫狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系并比較普通胃癌EBVaGC和殘胃癌EBVaGC中的腫瘤局部免疫狀態(tài)和腫瘤細(xì)胞凋亡的異

15、同。
　　 結(jié)果：
　　 1.殘胃癌EBVaGC中的CD3+TIL-T細(xì)胞、CD79α+B細(xì)胞和CD56+NK細(xì)胞數(shù)量均比EBVnGC多(P=0.017，P=0.014，P=0.008)，腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞主要為CD3+TIL-T細(xì)胞。殘胃癌EBVaGC中的CD8+T細(xì)胞數(shù)量比EBVnGC多(P=0.007)，而EBVaGC中CD4+T細(xì)胞數(shù)量比EBVnGC少(P=0.048)。EBVaGC中CD3+TIL-T細(xì)胞多數(shù)為C

16、D8+T細(xì)胞。EBVaGC中CD4/CD8比值明顯低于EBVnGC組(P=0.005)。EBVaGC中的Fascin+的TIDC數(shù)量、FoxP3+的CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量均比EBVnGC多(P=0.035，P=0.028)。
　　 2.殘胃癌EBVaGC中Ki67、IL-1β、顆粒酶B、IFN-γ陽性的CD8+T細(xì)胞百分率均比EBVnGC高(P=0.006，P=0.003，P=0.027，P=0.048)。而FasL

17、蛋白在CD8+T細(xì)胞的陽性表達(dá)率和TNF-α平均陽性CD8+T細(xì)胞百分率在EBVaGC和EBVnGC中的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均＞0.05)。EBVaGC中的IL-10平均陽性淋巴細(xì)胞百分率比EBVnGC中高(P=0.040)。
　　 3.殘胃癌EBVaGC的腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)低于EBVnGC腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)(P=0.042)。EBVaGC中的Survivin的表達(dá)強(qiáng)度比EBVnGC中高(P＜0.001)，而NF-κBp65、F

18、asL、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-10在殘胃癌EBVaCC和EBVnGC中表達(dá)差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 4.殘胃癌中EBVaGC中的CD4+T細(xì)胞數(shù)量和CD4/CD8比值明顯比普通胃癌EBVaGC中小(P=0.006，P=0.012)。Survivin在殘胃癌EBVaGC中腫瘤細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度強(qiáng)于普通胃癌EBVaGC(P＜0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 殘胃癌EBVaGC的腫瘤