腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞自噬調(diào)控對結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲性的影響.pdf

1、碩士學(xué)位論文論文題目腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞自噬調(diào)控對結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲性的影響研究生姓名粟文釗指導(dǎo)教師姓名邢春根專業(yè)名稱普通外科學(xué)研究方向胃腸道腫瘤論文提交日期2013年4月腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞自噬調(diào)控對結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲性的影響中文摘要I腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞自噬調(diào)控對結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲性的影響中文摘要目的：目的：研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞自噬調(diào)控后對三種人結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲性的影響。方法：方法：使用弗波酯PMA、人重組IL4激活人單核細(xì)胞THP1分化為M2（Ⅱtype

2、tumassociatedmacrophages）后，分別用不同濃度雷帕霉素（Rapamycin）干預(yù)其自噬狀況，進(jìn)而采用非接觸共培養(yǎng)方式將不同濃度自噬調(diào)控劑上調(diào)組M2、空白實(shí)驗(yàn)組M2分別與HCT116、LOVO、CACO2人結(jié)腸癌細(xì)胞共同培養(yǎng)48h。共培養(yǎng)之前采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定選擇激活途徑激活所得細(xì)胞表面CD68、CD204、CD206標(biāo)志性分子表達(dá)情況；應(yīng)用MDC熒光染色法、免疫熒光檢測自噬標(biāo)記性蛋白LC3觀察自噬調(diào)控劑作用后各組M

3、2自噬的發(fā)生情況；應(yīng)用transwell小室、細(xì)胞劃痕方法分別檢測各組人結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲、運(yùn)動能力；采用免疫熒光法觀察侵襲相關(guān)蛋白Ecadherin、Vimentin、P53、NM23h1在各組人結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)情況；最后應(yīng)用半定量RTPCR、WesternBlot技術(shù)分別對各組人結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲相關(guān)基因及蛋白進(jìn)行檢測。結(jié)果：結(jié)果：人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞THP1在通過PMAPMA、人重組IL4依次序貫作用總計(jì)72h小時后，檢測所得2種貼壁細(xì)

4、胞表面CD68、CD204、CD206的表達(dá)水平，流式細(xì)胞檢測結(jié)果表現(xiàn)為經(jīng)上述2種藥物作用后所得的細(xì)胞表面CD68、CD204、CD206表達(dá)皆不僅高于未經(jīng)處理的THP1細(xì)胞，也高于只經(jīng)PMA作用所得的細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。針對M2自噬水平的LC3免疫熒光及自噬囊泡MDC熒光蛋白染色檢測結(jié)果顯示：在經(jīng)過不同濃度自噬上調(diào)控劑作用后的M2自噬標(biāo)志性蛋白LC3在撤除干預(yù)藥物48h后仍然顯著表達(dá)，自噬標(biāo)志性蛋白LC3熒光表達(dá)強(qiáng)