擬南芥5，10-亞甲基四氫葉酸脫氫酶-5，10-次甲基四氫葉酸環(huán)化酶基因克隆和功能的研究.pdf

1、5，10-亞甲基四氫葉酸脫氫酶(5，10-methylene-tetrahydrofolatedehydrogenase，DHY)和5，10-次甲基四氫葉酸環(huán)化酶(5，10-methenyl-tetrahydrofolatecyclohydrolase，CYC)是在5，10-亞甲基四氫葉酸鹽(5，10-methylene-tetrahydrofolate)和10-甲?；臍淙~酸鹽(10-formyl-tetrahydrofolate)相

2、互轉(zhuǎn)換過程中起重要作用的酶。本文首先采用RT-PCR技術(shù)從擬南芥中分離獲得三個(gè)DHY/CYC基因的cDNA序列，然后通過對(duì)這三個(gè)DHY/CYC進(jìn)行原核表達(dá)以對(duì)它們的酶活性進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)這三個(gè)基因的擬南芥過表達(dá)植株進(jìn)行分析以利于對(duì)其生物功能的了解。主要研究結(jié)果如下： 1根據(jù)豌豆DHY/CYCcDNA序列設(shè)計(jì)引物，用RT-PCR的方法，從擬南芥中分離到3個(gè)cDNA序列，分別為906bp、1065bp和1101bp，依次命名為FL1、

3、FL2和FL3。經(jīng)BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)L1、FL2和FL3的氨基酸序列與豌豆的DHY/CYC序列的同源性分別為81％、64％和64％，表明這三個(gè)cDNA均可能編碼DHY/CYC蛋白； 2利用Gateway技術(shù)將FL1、FL2，F(xiàn)L3克隆到過表達(dá)載體pK7WG2，成功構(gòu)建了FL1，F(xiàn)L2和FL3的過表達(dá)載體，并通過花沾法侵染擬南芥野生型，獲得陽性轉(zhuǎn)基因株系并對(duì)其進(jìn)行分析。 3將FL1、FL2和FL3序列克隆到原核表達(dá)載體