雷公藤對(duì)STZ誘導(dǎo)的1型糖尿病小鼠的療效研究.pdf

1、背景：1型糖尿病（Type1 diabetes mellitus，T1DM），又稱自身免疫性糖尿病，舊稱青少年型糖尿病?，F(xiàn)已少用此類稱呼，因?yàn)檫^(guò)去我們對(duì)糖尿病的認(rèn)識(shí)不足，常常將 T1DM定位于兒童或青少年。T1DM患者大約占糖尿病病人總數(shù)的10％左右，根據(jù)2015年，國(guó)際糖尿病聯(lián)合會(huì)（IDF）發(fā)布的調(diào)查數(shù)據(jù)，全世界約有54萬(wàn)2千個(gè)兒童患有1型糖尿病。糖尿病的主要危害是長(zhǎng)期的高血糖所引起的血管及臟器損傷，造成患者患有一種或幾種糖尿病的慢性

2、并發(fā)癥。常見(jiàn)的如心血管疾病、糖尿病腎病等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量甚至最終導(dǎo)致死亡。與2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制相比，T1DM的有很大的不同，根本上是由于自身免疫性疾病所導(dǎo)致。機(jī)制可能是由于自身免疫系統(tǒng)破壞了產(chǎn)生胰島素的胰島β細(xì)胞而引起，主要特點(diǎn)為胰島素分泌的缺失，因此患者必須注射胰島素，并且依賴終身。β細(xì)胞是胰島細(xì)胞的重要構(gòu)成部分，約占胰島細(xì)胞的近80%。某些病毒會(huì)(如腮腺炎病毒、柯薩奇 B4病毒或風(fēng)疹病毒等)侵犯感染胰島細(xì)胞，有些毒性化學(xué)物

3、質(zhì)(如吡甲硝苯脲，鏈脲佐菌素，四氧嘧啶等)也會(huì)對(duì)胰島β細(xì)胞損傷，造成自身非免疫性損傷，或者因β細(xì)胞的破壞，釋放出一些致敏蛋白從而引起自身免疫性的損傷(其中包括細(xì)胞免疫和體液免疫的共同參與)，引發(fā)胰島的自身免疫性炎癥損傷和凋亡，導(dǎo)致胰島β細(xì)胞的嚴(yán)重破壞。其中鏈脲佐菌素(STZ)是一項(xiàng)技術(shù)非常成熟的動(dòng)物糖尿病模型建造試劑，對(duì)胰島β細(xì)胞具有特異性的毒性殺傷作用。多次中等劑量的注射的方法可以使嚙齒類動(dòng)物的β細(xì)胞大量較長(zhǎng)時(shí)間的破壞，持續(xù)胰島炎癥反

4、應(yīng)，與人的T1DM發(fā)病過(guò)程較類似。免疫抑制劑用于結(jié)締組織病和自身免疫病等的治療。雷公藤又名黃藤，是我國(guó)傳統(tǒng)中草藥。衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，具有活血化瘀、清熱解毒、消腫散結(jié)等功效，還具有抗炎、治療神經(jīng)性退化疾病等多種藥理活性。近年來(lái)在糖尿病腎病的領(lǐng)域中已有使用雷公藤制劑治療的相關(guān)臨床研究經(jīng)驗(yàn)分享報(bào)告。針對(duì)國(guó)內(nèi)應(yīng)用雷公藤多苷治療糖尿病腎病的薈萃分析顯示，雷公藤多苷能減少糖尿病腎病患者尿中的白蛋白含量，而對(duì)血清肌酐（Scr）和血尿素氮?jiǎng)t無(wú)明顯影響

5、。另有文獻(xiàn)報(bào)道，雷公藤另一種活性成分：雷公藤甲素，可以通過(guò)激活凋亡蛋白酶Caspases，從而誘導(dǎo)外周 T細(xì)胞的凋亡，而對(duì)胸腺細(xì)胞不產(chǎn)生影響。另有研究發(fā)現(xiàn)，其還能有效地通過(guò)激活Caspase－3，而誘導(dǎo)有抗原提呈作用的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)凋亡等從而起到抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)。對(duì)體液免疫的影響方面，Jianan Ren等研究表明雷公藤多苷可以有效使血清中的 C反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子和白介素-1β明顯減少。楊帆等人研究發(fā)現(xiàn)雷公藤制劑能夠通過(guò)抑制巨噬

6、細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素-6，而減輕炎癥反應(yīng)。
　　目的：探討雷公藤對(duì)STZ損傷的β細(xì)胞功能的影響。
　　方法：⑴健康8周齡 C57BL/6小鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后進(jìn)行隨機(jī)分組。除對(duì)照組，STZ組和STZ+雷公藤組小鼠均進(jìn)行 STZ的注射造模。⑵STZ+雷公藤組每日上午9點(diǎn)行雷公藤藥物灌胃治療，其余兩組行生理鹽水灌胃做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。⑶每天檢查小鼠的生活環(huán)境狀況，如精神狀態(tài)、飲食情況、運(yùn)動(dòng)程度、皮毛光澤等。并每周監(jiān)測(cè)血糖、體重、飲食量等。

7、實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死小鼠，分別收集血液和組織材料，妥善固定及冷凍。⑷將胰腺組織進(jìn)行石蠟切片后經(jīng)蘇木精—伊紅染色（ Hematoxylin-eosin,HE）染色，在顯微鏡下觀察胰島細(xì)胞變化情況。⑸血液離心后，檢測(cè)小鼠血漿上清液中胰島素(INS)及胰島素自身抗體（IAA）水平情況。
　　結(jié)果：①與對(duì)照組小鼠相比，STZ組小鼠的體重明顯減輕。②經(jīng)過(guò)6周的雷公藤灌胃治療后，口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（oral glucose tolerance te

8、st，OGTT）測(cè)定血糖曲線下面積（area under the cure，AUC）顯示，與STZ組相比，STZ+雷公藤組小鼠糖耐量明顯改善。③與對(duì)照組小鼠相比，STZ組 INS明顯減少， STZ+雷公藤組 INS水平高于 STZ組，而STZ+雷公藤組IAA水平低于STZ組。④HE染色顯示，對(duì)照組胰島細(xì)胞致密，排列有序，間隙小，胞質(zhì)核仁飽滿。STZ組胰島皺縮，細(xì)胞排列紊亂有空泡，核致密，胞漿少。STZ+雷公藤組胰島雖未有皺縮，但胰島細(xì)胞