14-3-3η介導(dǎo)的辣椒素抗心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　辣椒素（Cap）是從辣椒植物中提取，具有刺激性氣味的生物堿。近來研究已報(bào)道了心血管疾病中辣椒素的保護(hù)作用。線粒體被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的控制中心，在凋亡信號(hào)通路中起著非常重要的作用。14-3-3η可能作為心肌細(xì)胞I/R損傷的保護(hù)因子，參與穩(wěn)定線粒體膜電位，防止線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）的開放，從而最終減少細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建細(xì)胞水平的A/R模型，旨在確定辣椒素預(yù)處理對(duì)抗A/R損傷保護(hù)心肌細(xì)胞的作用是否涉及線粒體凋亡通路，

2、并進(jìn)一步探討辣椒素保護(hù)心肌細(xì)胞的可能機(jī)制。
　　方法：
　　在本研究采用H9c2心肌細(xì)胞株，建立急性心肌A/R損傷模型，將狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為6組：
　?。?）正常對(duì)照組（Control）；
　?。?）缺氧/復(fù)氧組（A/R）；
　?。?）10μM辣椒素預(yù)處理組（Cap+A/R）；
　?。?）10μM辣椒素+AD-14-3-3ηRNAi預(yù)處理組（Cap+AD-14-3-3ηRNAi+A/R

3、）；
　?。?）10μM辣椒素+ADscrRNAi預(yù)處理組（Cap+ADscrRNAi+A/R）；
　　（6）10μM辣椒素+2μM ABT-737預(yù)處理組（Cap+ABT-737+A/R）。MTS比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率，分光光度法檢測(cè)各組細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）開放的程度和半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）活性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的產(chǎn)生和細(xì)胞凋亡水平；Western

4、blotting（免疫印跡）檢測(cè)14-3-3η，抗凋亡Bcl-2蛋白和促凋亡Bax蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各辣椒素濃度實(shí)驗(yàn)組缺氧復(fù)氧處理后，Cap的預(yù)處理能夠以劑量相關(guān)性增加心肌細(xì)胞的存活率，減少心肌細(xì)胞的LDH釋放，10μM辣椒素預(yù)處理組減輕心肌細(xì)胞損傷具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.與A/R組相比，終濃度為10μM的Cap預(yù)處理顯著減弱ROS的產(chǎn)生，抑制的mPTP開放和caspase-3活化，明顯下調(diào)Bax的表

5、達(dá)和上調(diào) Bcl-2和14-3-3η的表達(dá)，并最終顯著減少 H9c2心肌細(xì)胞的凋亡。
　　3.辣椒素預(yù)處理H9c2心肌細(xì)胞前，加入14-3-3ηRNAi腺病毒明顯削弱Cap預(yù)處理抗H9c2心肌細(xì)胞A/R損傷的保護(hù)作用。此外，與Cap+A/R組比較，加入ABT-737（Bcl-2抑制劑）也顯著削弱Cap保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。
　　結(jié)論：
　　辣椒素預(yù)處理能夠抑制線粒體凋亡通路，對(duì)抗H9c2心肌細(xì)胞的缺氧復(fù)氧損傷；辣椒素對(duì)心