Efp蛋白介導(dǎo)芹菜素抗心肌缺氧-復(fù)氧損傷保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　芹菜素屬于黃酮類化合物，廣泛存在于多種蔬菜、中藥材中。研究發(fā)現(xiàn)其具有多種藥理學(xué)活性，其中發(fā)現(xiàn)具有抗心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用但其機(jī)制還尚未清楚。本實(shí)驗(yàn)采用了H9c2心肌細(xì)胞，成功建立H9c2心肌缺氧/復(fù)氧（A/R）損傷模型，并利用已經(jīng)構(gòu)建成功的efp-siRNA腺病毒，深入探討芹菜素抗H9c2心肌樣細(xì)胞缺氧復(fù)氧（A/R）損傷的保護(hù)作用與雌激素效應(yīng)環(huán)指蛋白（efp）蛋白之間的關(guān)系。
　　方法：
　　采用狀態(tài)

2、良好的H9c2心肌細(xì)胞，經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)后隨機(jī)分成五組，每組重復(fù)六次：（1）正常對(duì)照組(Control)、（2）缺氧/復(fù)氧組（A/R）、（3）芹菜素+A/R組(apigenin+A/R)、（4）芹菜素+陰性對(duì)照+A/R組(apigenin+NC+A/R)、（5）芹菜素+efp-siRNA+A/R組(apigenin+efp-siRNA+A/R)。采用MTT比色法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率；采用Western blotting（免疫印跡）法測(cè)定ef

3、p蛋白表達(dá)水平；采用流式細(xì)胞儀測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的細(xì)胞凋亡水平以及細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位（Δψm）穩(wěn)定性、活性氧（ROS）含量；采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞上清中丙二醛(MDA)的含量以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。
　　結(jié)果：
　　在成功建立缺氧復(fù)氧損傷模型基礎(chǔ)上，H9c2心肌細(xì)胞經(jīng)過芹菜素預(yù)處理24h后再經(jīng)過A/R損傷后，與A/R組相比，H9c2心肌細(xì)胞中efp蛋

4、白表達(dá)水平明顯上調(diào)具有顯著性差異(P<0.01)；不同濃度芹菜素預(yù)處理組與A/R組相比，40μM濃度的芹菜素預(yù)處理組中efp蛋白表達(dá)量上調(diào)最為明顯且細(xì)胞存活率最高，具有顯著性差異(P<0.01)；通過酶聯(lián)免疫法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞上清后，與A/R組相比：芹菜素+A/R組MDA含量下降、LDH活性下降，SOD與GSH-Px活性都分別增強(qiáng)，具有顯著性差異(P<0.01)；采用流式細(xì)胞儀測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組后，與A/R組相比：芹菜素+A/R組細(xì)胞凋亡數(shù)量