VDAC在心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)擬以心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(anoxia-reoxygenation,A/R)為模型,探討在心肌組織表達(dá)豐度最高的VDAC1在心肌急性損傷中的作用及機(jī)制,進(jìn)一步探討心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷機(jī)制。
　　 方法:以pSuper.Retro質(zhì)粒為載體,構(gòu)建shRNA VDAC1質(zhì)粒。通過基因轉(zhuǎn)染和RNA干擾技術(shù),建立心肌細(xì)胞H9C2 VDAC1蛋白正常表達(dá)組與低表達(dá)組,Western blot法測(cè)定VDAC1的蛋白表達(dá)檢測(cè)重組質(zhì)

2、粒的干擾效率。實(shí)驗(yàn)分四組,每組重復(fù)6次。①Control組；②A/R組；③pSuper+A/R組；④ps-VDAC1+A/R組。通過MTT法測(cè)定VDAC1各表達(dá)組心肌細(xì)胞存活率；利用流式細(xì)胞儀測(cè)定線粒體膜電位、細(xì)胞凋亡程度。
　　 結(jié)果:轉(zhuǎn)染質(zhì)粒shRNA VDAC1的H9c2細(xì)胞VDAC1的蛋白表達(dá)比正常組低,表明重組質(zhì)粒能下調(diào)H9c2細(xì)胞VDAC1蛋白表達(dá)。經(jīng)缺氧復(fù)氧損傷,VDAC1正常表達(dá)組細(xì)胞凋亡明顯比Control組嚴(yán)