小半夏加茯苓醇提物誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究小半夏加茯苓醇提物對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的增殖抑制作用以及對(duì)HepG2凋亡、線粒體跨膜電位、凋亡相關(guān)基因p38、bax、cjun的影響，探討該復(fù)方體外誘導(dǎo)HepG2凋亡的分子機(jī)制，為臨床應(yīng)用該復(fù)方輔助治療腫瘤疾病提供理論支撐和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:制備小半夏加茯苓醇提物，運(yùn)用高效液相色譜法檢測(cè)醇提物中6-姜酚和總生物堿的含量;運(yùn)用倒置相差顯微鏡觀察小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2生長(zhǎng)狀態(tài)的影響;運(yùn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒分別檢測(cè)9

2、00ug/ml、800ug/ml、700ug/ml、600ug/ml、500ug/ml等不同濃度的小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2的抑制作用，并計(jì)算生長(zhǎng)抑制率及半數(shù)抑制濃度;運(yùn)用凋亡雙染法檢測(cè)800ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2凋亡的影響;運(yùn)用羅丹明123檢測(cè)800ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2線粒體跨膜電位的影響;運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)800ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2 p38、bax、cjun

3、等凋亡相關(guān)基因的影響。
　　結(jié)果:
　　1.高效液相色譜法檢測(cè)得出，1mg小半夏加茯苓醇提物含6-姜酚和總生物堿分別為0.75ug和19.74ug。
　　2.倒置相差顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，空白對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)飽滿(mǎn)，邊界清晰，胞質(zhì)豐富，胞核呈圓形或橢圓形;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞外形不規(guī)則，邊界不清，細(xì)胞核濃縮或碎裂，出現(xiàn)較多的懸浮死細(xì)胞。
　　3.細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，900ug/ml、800ug/ml、700ug/ml、600ug

4、/ml、500ug/ml的小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2均有顯著的抑制作用;并隨著醇提物濃度的增加，抑制率逐次升高;小半夏加茯苓醇提物作用于HepG2的半數(shù)抑制濃度為(781.70±8.48) ug/ml。
　　4.凋亡雙染法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與同時(shí)段的空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的早期凋亡率和晚期凋亡率均升高。
　　5.羅丹明123檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與同時(shí)段的空白對(duì)照組相比，24h的實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度升高，48h的實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度顯著升高。
　

5、　6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組p38基因的相對(duì)表達(dá)量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，bax、cjun基因的相對(duì)表達(dá)量均顯著升高。
　　結(jié)論:
　　1.小半夏加茯苓醇提物對(duì)HepG2的增殖有明顯的抑制作用，其抑制率與醇提物濃度呈正相關(guān)。
　　2.小半夏加茯苓醇提物能夠誘導(dǎo)HepG2凋亡的發(fā)生。
　　3.小半夏加茯苓醇提物抑制HpeG2增殖并誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制可能為，通過(guò)增強(qiáng)cjun和bax的表達(dá)，使ba