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文檔簡介
1、目的:多囊卵巢綜合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是育齡期女性常見的內(nèi)分泌和代謝紊亂性疾病之一,其內(nèi)分泌及代謝系統(tǒng)的異常往往表現(xiàn)為損害女性生殖健康甚至造成不孕。此類患者其卵巢中卵泡刺激素(Follicle Stimulating Hormone,F(xiàn)SH)的作用受到阻滯,最終導(dǎo)致卵泡異常閉鎖,不排卵。BMAL1(Brain and muscle ARNT-like protein1)被認為在哺乳動物生
2、殖系統(tǒng)卵巢的卵泡發(fā)育和激素合成中起到重要作用,對于維持哺乳動物生殖功能有著重要的功能。SIRT1(Sirtuin1)在維持哺乳動物卵泡發(fā)育過程正常進行中起到重要作用,并通過與 BMAL1相互作用而呈現(xiàn)節(jié)律性表現(xiàn)。研究顯示,其在顆粒細胞等雌激素合成細胞中對芳香化酶的表達調(diào)控起到重要作用。然而,BMAL1在PCOS患者卵巢顆粒細胞中表達與正常人群是否存在差異,人的顆粒細胞中BMAL1是否參與同時如何調(diào)控雌激素合成,SIRT1在此過程中扮演著
3、什么樣的角色仍是不明確的。我們的實驗旨在研究 BMAL1是否與 PCOS的發(fā)生發(fā)展存在聯(lián)系,BMAL1是否并且如何在人顆粒細胞中對雌激素合成起到調(diào)控作用。
方法:⑴納入了2014年9月-2015年9月在仁濟醫(yī)院生殖中心 IVF/ICSI-ET予長方案促排卵,以 hCG為扳機方式的PCOS患者及非 PCOS患者各24例,檢測記錄了包括年齡、BMI、空腹血糖、hCG用量等臨床指標,收集其卵巢卵泡液樣本并進行顆粒細胞提取,通過 qR
4、T-PCR檢測兩組人群顆粒細胞中BMAL1 mRNA的水平。⑵利用人原代顆粒細胞及人卵巢顆粒細胞系KGN作為細胞模型,采用干擾RNA、過表達、添加抑制劑等實驗,通過免疫化學(xué)發(fā)光檢測細胞上清液雌激素合成,qRT-PCR以及Western Blot等實驗方法來對人卵巢顆粒細胞內(nèi)BMAL1對芳香化酶表達及雌激素合成調(diào)節(jié)的具體機制進行進一步的實驗分析。
結(jié)果:①qRT-PCR結(jié)果顯示,PCOS患者的卵巢顆粒細胞中 BMAL1的mRNA
5、表達水平顯著低于非PCOS患者(p<0.05)。②在KGN細胞中敲低BMAL1后細胞雌激素合成減少,同時其芳香化酶、SIRT1表達水平降低,過表達 BMAL1后,細胞雌激素合成水平升高,芳香化酶及 SIRT1表達水平升高。在 KGN細胞中敲低 SIRT1后細胞雌激素合成減少,同時芳香化酶、BMAL1表達水平降低,過表達 SIRT1后,細胞雌激素合成水平升高,芳香化酶及BMAL1表達水平升高。BMAL1和SIRT1敲低后細胞 JNK磷酸化
6、水平降低,JNK過表達實驗后細胞雌激素合成水平升高,芳香化酶,BMAL1及 SIRT1表達水平均表現(xiàn)為升高。應(yīng)用 JNK或 SIRT1抑制劑作用KGN細胞后,細胞雌激素合成降低,BMAL1、SIRT1和JNK表達水平下調(diào);抑制劑作用于原代顆粒細胞后同樣表現(xiàn)為細胞雌激素合成降低,BMAL1、SIRT1和JNK表達水平下調(diào)。
結(jié)論:闡述了BMAL1在人卵巢顆粒細胞中對雌激素合成的作用,發(fā)現(xiàn)了 BMAL1-SIRT1這一正反饋環(huán)路在
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