右美托咪定對(duì)缺氧-復(fù)氧損傷A549細(xì)胞的干預(yù)及機(jī)制.pdf

1、目的：觀察右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)對(duì)缺氧/復(fù)氧（ hypoxia/reoxygenation，H/R）損傷A549細(xì)胞的干預(yù)作用及機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)A549細(xì)胞，將長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞隨機(jī)分成4組（n=10）：常氧組（N組），DEX組（D組），H/R損傷組（H組），H/R損傷+DEX干預(yù)組（HD組）。造模前先將4組細(xì)胞的完全培養(yǎng)基更換成無(wú)血清的F12K培養(yǎng)基，在常氧培養(yǎng)箱中預(yù)處理1個(gè)小時(shí)。N組：A

2、549細(xì)胞在常氧培養(yǎng)箱中用無(wú)血清F12K培養(yǎng)液培養(yǎng)30h。D組：A549細(xì)胞用含DEX（1nM）的無(wú)血清F12K培養(yǎng)液在常氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30h。H組：A549細(xì)胞用OGD液在缺氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h，再用無(wú)血清F12K培養(yǎng)液在常氧培養(yǎng)箱中復(fù)氧24h。HD組：A549細(xì)胞缺氧處理6h，復(fù)氧24h， DEX（1nM）在缺氧開(kāi)始時(shí)加入培養(yǎng)液。造模結(jié)束后， A549細(xì)胞在倒置顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)改變的觀察。A549細(xì)胞活力檢測(cè)采用CCK-8法。A54

3、9細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）檢測(cè)采用原位末端標(biāo)記（TUNEL）法。蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GRP78、CHOP、p-JNK、caspase-12、caspase-3蛋白的表達(dá)水平。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ RT-PCR）檢測(cè)GRP78、CHOP、JNK、caspase-12 mRNA的表達(dá)水平。各組caspase-3酶的活性檢測(cè)采用caspase-3活性檢測(cè)試劑盒。
　　結(jié)果：⑴在N組和D組中，大量細(xì)胞呈梭型，

4、貼壁生長(zhǎng)。胞體明亮，細(xì)胞核完整，未見(jiàn)懸浮細(xì)胞。H組中貼壁細(xì)胞間間隙增大，數(shù)量減少顯著。細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)變化，細(xì)胞長(zhǎng)出分支，呈多邊型。有些細(xì)胞發(fā)生融合現(xiàn)象，細(xì)胞核固縮，胞體變暗。大量細(xì)胞碎片及死細(xì)胞漂浮在上清液中。與H組相比較，HD組貼壁細(xì)胞數(shù)相對(duì)較多，上清液中細(xì)胞碎片及死細(xì)胞數(shù)量減少。⑵與N組比較，H組A549細(xì)胞的OD值明顯下降（P＜0.01）。HD組與H組相比，OD值上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。⑶與N組比較， H組A549細(xì)

5、胞AI值升高（ P＜0.01），凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增加。HD組與H組相比，AI值降低明顯，凋亡細(xì)胞數(shù)相對(duì)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。⑷與N組相比，D組GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK和caspase-3蛋白水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；H組中 GRP78、CHOP、caspase-12、p-JNK和caspase-3蛋白表達(dá)均明顯升高(P＜0.01)。HD組與H組相比， CHOP、caspase-12、

6、p-JNK和caspase-3蛋白表達(dá)顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。⑸與N組相比，D組GRP78、CHOP、caspase-12和JNK mRNA水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；H組中GRP78、CHOP、caspase-12和JNK mRNA表達(dá)均明顯升高(P＜0.01)。HD組與H組相比，GRP78 mRNA表達(dá)上升(P＜0.01), CHOP、caspase-12、JNK mRNA表達(dá)顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P