2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是全球性人和動物傳染性腹瀉的重要病原體之一,給畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,同時給人類公共衛(wèi)生安全造成重要威脅。本研究利用PCR和基因重組等技術(shù),克隆了產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌STa和K99基因,并將其融合構(gòu)建了穿梭質(zhì)粒,將穿梭質(zhì)粒和骨架質(zhì)粒在293細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行包裝得到重組腺病毒。PCR鑒定結(jié)果表明,成功構(gòu)建了重組腺病毒載體Ad5 STaK99,在此基礎(chǔ)

2、上,利用Western blot方法對重組腺病毒進(jìn)行了融合蛋白表達(dá)的檢測及免疫原性研究,為研制預(yù)防由ETEC引起的新生動物腹瀉重組腺病毒載體疫苗奠定基礎(chǔ)。主要實驗結(jié)果如下:
   1.根據(jù)設(shè)計的特異引物,利用PCR技術(shù),成功克隆了STa基因和K99基因,核苷酸序列測定結(jié)果有一個堿基突變,導(dǎo)致一個氨基酸的突變,分析表明,兩氨基酸性質(zhì)相同,蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)預(yù)測一致,不影響蛋白的免疫原性。
   2.將克隆的STa、K99基因通

3、過T4連接酶與穿梭質(zhì)粒pAd5CMVK-NpA連接,成功構(gòu)建了穿梭質(zhì)粒pAd5 STa-K99。將穿梭質(zhì)粒pAd5 STa-K99和骨架質(zhì)粒經(jīng)PacⅠ分別進(jìn)行酶切后回收,在293細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行包裝,細(xì)胞出現(xiàn)明顯的病變效應(yīng),表明成功獲得了重組腺病毒。
   3.將獲得的重組腺病毒在293細(xì)胞內(nèi)大量擴增,通過CsCl密度梯度離心法進(jìn)行了純化,根據(jù)ST-K99融合基因特異引物進(jìn)行PCR反應(yīng),出現(xiàn)了預(yù)期大小的條帶,表明STa-K99融合基因

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