人參皂苷Rd抑制非小細(xì)胞肺癌的生長(zhǎng)及作用機(jī)制.pdf

1、研究目的:
　　探討周仲瑛教授經(jīng)驗(yàn)方“周氏克金巖方”之有效單體人參皂苷Rd在非小細(xì)胞肺癌的作用。本研究旨在探討:①人參皂苷Rd對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549、H460細(xì)胞活力的抑制作用;②人參皂苷Rd體外對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549、H460侵襲能力的影響;③體外對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549、H460細(xì)胞周期的影響及影響周期的蛋白表達(dá)以初步探討其作用機(jī)理。
　　研究方法:
　　①采用MTT法，觀察不同濃度的人參皂苷Rd體

2、外作用非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H460不同時(shí)間后對(duì)其細(xì)胞活力的影響;②利用高內(nèi)涵分析軟件，觀察不同濃度、不同時(shí)間作用于A549、H460細(xì)胞系的熒光強(qiáng)度以觀測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的影響;③采用細(xì)胞黏附人工重組基底膜培養(yǎng)小室（Transwell小室）法，觀察不同濃度的人參皂苷Rd對(duì)A549、H460侵襲能力的影響;④利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)A549、H460細(xì)胞系周期阻滯效應(yīng);⑤使用WesternBlot法檢測(cè)人參皂苷Rd對(duì)A549、H460細(xì)胞

3、系周期相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　研究結(jié)果:
　?、俑鱾€(gè)濃度的人參皂苷Rd對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H460均有不同程度的細(xì)胞活力抑制作用，并具有濃度-時(shí)間依賴性:作用A549、H460細(xì)胞株，藥物濃度25-100μmol/L具有明顯的抑制作用;48小時(shí)抑制率均明顯高于24小時(shí);人參皂苷Rd對(duì)快速生長(zhǎng)的H460抑制作用尤其明顯，并與順鉑相比較，具有明顯抑制作用。②人參皂苷Rd作用A549、H460后，高內(nèi)涵分析藥物對(duì)細(xì)胞

4、有明顯的抑制作用，呈時(shí)-效和量-效關(guān)系，尤其對(duì)H460作用明顯。③人參皂苷Rd作用于A5498h后，侵襲率與空白對(duì)照組相比明顯降低，并呈濃度依賴性。④與空白對(duì)照組比較，人參皂苷Rd作用A549、H460細(xì)胞24小時(shí)后，出現(xiàn)G0/G1期細(xì)胞比例逐漸上升，而S期的比例逐漸下降，細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。⑤Western blot顯示cyclin D1、cyclin E1、E2F1和CDK2/4能夠隨著處理濃度的增加，表達(dá)下降，而使細(xì)胞阻滯