IL-22對(duì)小鼠重癥急性胰腺炎腎損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的
　　本實(shí)驗(yàn)通過向小鼠腹腔注射高濃度左旋精氨酸建立重癥急性胰腺炎動(dòng)物模型，并用外源性白細(xì)胞介素-22(interleukin-22，IL-22)干預(yù)模型小鼠，觀察模型小鼠胰腺及腎臟的損傷情況。探索重癥急性胰腺炎相關(guān)腎損傷發(fā)病機(jī)制，同時(shí)研究外源性IL-22對(duì)左旋精氨酸誘導(dǎo)的重癥急性胰腺炎相關(guān)腎損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)的作用機(jī)制。
　　方法
　　選取48只健康雄性SPF級(jí)的BALB/c小鼠，隨機(jī)分為4組（每組12只）:正

2、常對(duì)照組(NS組)，重癥急性胰腺炎模型組（SAP組），IL-22治療組（IL-22組），PBS治療對(duì)照組（PBS組）。SAP模型小鼠的造模方法為分2次腹腔內(nèi)注射20％左旋精氨酸(4g/kg體質(zhì)量，間隔1h);NS組在同樣的時(shí)間節(jié)點(diǎn)腹腔內(nèi)注入等量無(wú)菌生理鹽水。IL-22組在造重癥急性胰腺炎模型的同時(shí)分5次皮下注射重組小鼠IL-22(200ng/次，間隔24h)，PBS組在相同時(shí)間點(diǎn)皮下注射等量的PBS溶液。觀察并記下各組小鼠活動(dòng)狀態(tài)及存活

3、狀況。注射左旋精氨酸或生理鹽水72h后，統(tǒng)計(jì)每組小鼠死亡率后采集小鼠全血，剖取胰腺和腎臟組織。光鏡下觀察胰腺和腎臟組織HE染色后的切片的病理學(xué)改變并分別給胰腺和腎的病理?yè)p傷程度評(píng)分;用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清中淀粉酶(amylase，AMY)、肌酐(creatinine，Cr)、尿素氮(bloodureanitrogen，BUN)的水平。WesternBlotting方法檢測(cè)腎組織中總的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(signaltransduc

4、erandactivatoroftranscription-3，STAT3)及磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白的表達(dá)量;RT-PCR法檢測(cè)腎組織中IL-22RA1、Bcl-2和Bcl-XL的mRNA相對(duì)表達(dá)量。采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料分析采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)量用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，死亡率分析采用fisher確切概率法，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　

5、光學(xué)顯微鏡下觀察NS組小鼠HE染色的病理切片:胰腺組織無(wú)壞死及水腫，胰腺細(xì)胞排列規(guī)律;腎組織無(wú)明顯病理?yè)p傷改變。與NS組相比較，左旋精氨酸誘導(dǎo)的SAP組和PBS組小鼠，胰腺細(xì)胞壞死，組織腫脹，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腎臟皮質(zhì)區(qū)部分腎小管管腔擴(kuò)張，間隙增寬，血清AMY、Cr、BUN水平較其明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)均有意義（P＜0.05）。相較于PBS組，IL-22組小鼠胰腺組織損傷明顯減輕，腎組織切片無(wú)明顯病理?yè)p傷，且血清中AMY、Cr、BUN水平有不

6、同程度減低(P＜0.05)，兩組小鼠腎組織中STAT3蛋白總表達(dá)量無(wú)明顯差異，但I(xiàn)L-22組腎臟中p-STAT3蛋白表達(dá)量增高，且RT-PCR檢測(cè)IL-22RA1、Bcl-2及Bcl-XL的mRNA表達(dá)均有升高（P＜0.05)。IL-22組小鼠病死率為8.3％，PBS組小鼠病死率為41.7％，P=0.77，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論
　　腹腔注射高濃度左旋精氨酸可以建立小鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性腎損傷模型。外源性IL-22對(duì)