2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率和死亡率在我國及全世界均高居首位。肺腺癌是肺癌最常見的組織類型之一,發(fā)現(xiàn)時常處于晚期,預后較差。近年雖在分子機制研究上取得較大進展,但其發(fā)病機制遠未闡明。因此研究肺腺癌的致病驅(qū)動基因,探尋肺腺癌新的治療靶基因具有重大意義。研究表明,MGST1與食管癌、上皮性卵巢癌、前列腺癌等多種腫瘤發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān),且在轉(zhuǎn)基因小鼠肺癌中高表達,但其在肺癌中所發(fā)揮的功能和作用機制研究尚未見報道。前期研究發(fā)現(xiàn)MGST1

2、在人肺腺癌組織標本中高表達,抑制肺腺癌細胞A549中MGST1的表達后,可抑制細胞增殖活性,促進細胞凋亡的發(fā)生,但機制尚未闡明。因此,闡明MGST1促進肺腺癌凋亡的作用機制有待進一步研究,MGST1有望成為肺腺癌新候選治療靶基因。
  目的:
  本實驗運用慢病毒干擾肺腺癌細胞系PC-9內(nèi)源性MGST1的表達和過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺腺癌細胞系SPC-A-1增加外源性MGST1的表達,從正反兩方面初步研究MGST1在肺腺癌細胞中發(fā)揮

3、的生物學功能,并進行機制探討,旨在獲得MGST1在肺腺癌惡性進程中發(fā)揮重要作用的可靠實驗證據(jù),為MGST1成為肺腺癌新候選治療靶基因提供科學依據(jù)。
  方法:
  本實驗運用Western-blot檢測肺上皮細胞系BEAS-2B及肺腺癌細胞系SPC-A-1、H2342、A549、H1975、PC-9、XLA-07中MGST1蛋白的基石出表達水平,并選擇PC-9及SPC-A-1作為后期研究的工具細胞;
  運用慢病毒感染

4、肺腺癌PC-9細胞,干擾內(nèi)源性MGST1的表達,Western-blot驗證干擾效果、MTS檢測增殖活性、克隆形成實驗檢測克隆形成能力、流式細胞儀檢測細胞凋亡、Western-blot檢測相關(guān)凋亡蛋白變化;
  運用構(gòu)建重組質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染篩選穩(wěn)定過表達基因細胞系的方法,建立穩(wěn)定過表達MGST1的SPC-A-1細胞系,Real-time QPCR檢測MGST1mRNA的表達水平、Western-blot檢測MGST1蛋白的表達水平、MT

5、S檢測增殖活性、克隆形成實驗檢測克隆形成能力、流式細胞儀檢測H2O2誘導細胞凋亡、Western-blot檢測相關(guān)凋亡蛋白變化。
  結(jié)果:
  1.MGST1蛋白在肺上皮細胞系及肺腺癌細胞系中的表達情況
  Western-blot結(jié)果顯示:MGST1蛋白在肺腺癌細胞中的表達水平均比肺上皮細胞BEAS-2B高,且以H1975、PC-9、XLA-07細胞表達相對較高,SPC-A-1、H2342、A549細胞表達相對較低

6、。根據(jù)基礎(chǔ)表達情況,后期選擇PC-9作為慢病毒干擾MGST1的細胞系,SPC-A-1作為構(gòu)建穩(wěn)定過表達MGST1的細胞系。
  2.慢病毒干擾PC-9細胞MGST1的表達后,促進PC-9細胞凋亡
  MGST1干擾慢病毒感染PC-9細胞后,Western-blot結(jié)果顯示:MGST1蛋白表達顯著減少,表明感染慢病毒成功發(fā)揮干擾蛋白表達的作用;
  MTS結(jié)果顯示:干擾MGST1的表達后,PC-9細胞增殖活性受到明顯抑制

7、;
  克隆形成實驗結(jié)果顯示:干擾MGST1的表達后,PC-9細胞克隆形成能力明顯被抑制;
  流式細胞儀檢測凋亡結(jié)果顯示:干擾MGST1的表達后,PC-9細胞凋亡顯著增加;
  Western-blot檢測凋亡相關(guān)蛋白結(jié)果顯示:干擾PC-9細胞的MGST1表達后,凋亡蛋白caspase9、caspase3、PARP表達降低,cleaved-caspase9、cleaved-caspase3、cleaved-PARP表

8、達明顯升高。
  3.SPC-A-1細胞過表達MGST1基因后,抑制H2O2誘導SPC-A-1細胞的凋亡
  測序鑒定MGST1過表達質(zhì)粒構(gòu)建成功,Real-time QPCR和Western-blot結(jié)果驗證MGST1在穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系SPC-A-1中轉(zhuǎn)錄和蛋白水平表達均升高,表明穩(wěn)定過表達MGST1的SPC-A-1細胞系成功建立;
  MTS結(jié)果顯示:穩(wěn)定過表達MGST1基因后,SPC-A-1細胞的增殖活性明顯增加;

9、r>  克隆形成實驗結(jié)果顯示:穩(wěn)定過表達MGST1基因后,SPC-A-1細胞克隆形成能力明顯增強;
  流式細胞儀檢測凋亡結(jié)果顯示:穩(wěn)定過表達MGST1基因后,H2O2誘導的SPC-A-1細胞凋亡顯著減少;
  Western-blot檢測凋亡相關(guān)蛋白結(jié)果顯示:穩(wěn)定過表達SPC-A-1細胞MGST1基因后,H2O2誘導的SPC-A-1細胞凋亡蛋白caspase9、caspase3、PARP表達增多,cleaved-caspa

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