兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與Buffy coat體外軟骨分化的比較分析.pdf

1、目的:比較分析兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells，MSC)與含有單核細(xì)胞、生長因子和細(xì)胞因子等的Buffy coat在體外軟骨分化，為Buffy coat治療軟骨損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:動(dòng)物選取新西蘭系大白兔12只(16周齡，體重3±0.5kg)，隨機(jī)分為:MSC組（陰性對(duì)照組，n=3），采集骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)，不添加轉(zhuǎn)化生長因子-β（Transforing growth factor

2、-β，TGF-β）的誘導(dǎo)下培養(yǎng)。Buffy coat組（實(shí)驗(yàn)組，n=6），采用Buffy coat不經(jīng)過體外的傳代培養(yǎng)，在軟骨誘導(dǎo)液下培養(yǎng)。MSC+TGF組（陽性對(duì)照組，n=3），采集骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞，添加TGF-β的誘導(dǎo)下培養(yǎng)。通過大體觀察、組織學(xué)觀察、糖胺多糖(Glycosamino glycan, GAG)檢測(cè)，和體外軟骨BERN的評(píng)分比較三組在體外分化的能力。
　　結(jié)果:
　　1)大體觀察:MSC組培養(yǎng)的軟骨部分已

3、經(jīng)溶解，邊緣模糊;MSC+TGF組與Buffy coat組基本沒有溶解現(xiàn)象，邊緣圓潤、清晰。
　　2)番紅O染色鏡下觀察:MSC組軟骨細(xì)胞生長緩慢，分布不均勻，數(shù)量極少，有極少量GAG的分泌現(xiàn)象出現(xiàn)，分泌不規(guī)則;有少數(shù)細(xì)胞可以找到軟骨細(xì)胞特有的Cartilage lacuna結(jié)構(gòu)。Buffy coat組與MSC+TGF組軟骨細(xì)胞生長速度較快，細(xì)胞分布較均勻，細(xì)胞數(shù)量較多，表面較平整、周圍較圓潤，有較多GAG分泌現(xiàn)象出現(xiàn)，基本分布在

4、軟骨細(xì)胞周圍;有較多細(xì)胞可以找到Cartilage lacuna結(jié)構(gòu)。
　　3)糖胺多糖(GAG)含量測(cè)定:MSC組:7.78±1.79μ g，Buffy coat組:22.83±3.11μ g，MSC+TGF組:24.05±3.35μ g。三組間存有顯著差異，MSC組與MSC+TGF組、MSC與Buffy coat組，組間存在顯著差異(P＜0.05);Buffy coat組與MSC+TGF組，組間無顯著差異(P＞0.05)。

5、r>　　4)體外軟骨BERN評(píng)分:MSC組:2.83±1.16，Buffy coat組:6.16±1.16，MSC+TGF組:6.68±0.81。三組間存在顯著差異，MSC組與MSC+TGF組、MSC與Buffy coat組，組間存在顯著差異(P＜0.05)，Buffy coat組與MSC+TGF組，組間無顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:Buffy coat具有良好的體外軟骨分化能力，可以解決目前體外分化軟骨必須添加生長因子