纈沙坦通過NOX2、NOX4途徑減輕阿霉素心臟毒性作用的研究.pdf

1、目的：
　　探討纈沙坦通過NOX2、NOX4介導(dǎo)的對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠心肌損傷預(yù)保護作用及其可能機制。
　　方法：
　　選擇8周齡SPF級、雄性、Sprague-Dawley（SD)大鼠，每只體重（170±10）g，共40只，隨機分為三組，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后開始造模。模型組（n=18）：使用0.9％氯化鈉將阿霉素配制為2mg/ml溶液，按1.25ml/kg.Body Weight(BW)，腹腔注射，每周1次，共6周，按照2

2、ml/kg.BW使用0.9％氯化鈉灌胃。纈沙坦干預(yù)組（n=14）：在與模型組相同處理的同時給予纈沙坦干預(yù)，用0.9％氯化鈉將纈沙坦配成10mg/ml溶液，按2ml/kg.BW給予灌胃，每天給藥1次，連續(xù)6周；正常對照組（n=8）腹腔注射等量0.9％氯化鈉，灌胃等量0.9％氯化鈉。三組每周均根據(jù)體重調(diào)整藥物劑量，其他飼喂條件相同，藥物干預(yù)后觀察至10周。隨后，分別進行心臟超聲；HE和Sirius red染色病理檢查；運用ELISA法測定心

3、肌組織中腎素(Renin)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、活性氧簇(ROS)、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)相關(guān)指標(biāo)的蛋白表達水平；Western blot檢測NOX2、NOX4的蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　造模第10周，正常對照組、模型組、纈沙坦干預(yù)組的生存率分別為100%（8/8）、66.66%（12/18)和85.71%（12/14）。大鼠心臟超聲檢測顯示模型組、纈沙坦干預(yù)組及正常對照組的

4、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）分別為(60.06±13.54)%、(75.31±10.39)%和(89.11±2.09)%，模型組和纈沙坦干預(yù)組與正常對照組相比較LVEF顯著降低；而纈沙坦干預(yù)組的LVEF值又顯著高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。模型組、纈沙坦干預(yù)組及正常對照組的左心室收縮末徑(LVESD)分別為(2.70±1.02)mm、(2.48±0.89)mm和(1.38±0.52)mm，與正常對照組相比，模型組和纈沙坦干

5、預(yù)組的LVESD值均顯著增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而纈沙坦干預(yù)組與模型組的LVESD相比較有降低趨勢，但無顯著差異(P>0.05)。模型組、纈沙坦干預(yù)組及正常對照組的左室短軸縮短率(LVFS)依次為(60.44±6.61)%、(30.84±10.68)%和(58.15±13.34)%，正常對照組的LVFS值明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，纈沙坦干預(yù)組與對照組比較無明顯差異(P>0.05)。三組間比較左心室

6、舒張末徑(LVEDD)無顯著性差異。
　　病理：（1）HE染色：正常對照組可見心肌纖維排列有序，染色均勻，未見腫脹、斷裂；模型組:心肌纖維排列紊亂、變細(xì)、溶解斷裂,細(xì)胞間質(zhì)水腫,心肌細(xì)胞空泡樣變。纈沙坦干預(yù)組:心肌細(xì)胞排列較整齊,局部出現(xiàn)肌漿溶解,少部分細(xì)胞間質(zhì)腫脹。（2）Sirius red染色：正常膠原纖維著色為紅色，心肌纖維著色成黃色。正常對照組：心肌纖維排列整齊，心肌間質(zhì)和血管周圍有少量猩紅色膠原纖維；模型組：心肌纖維結(jié)構(gòu)

7、排列紊亂，血管及心肌纖維間質(zhì)周圍分布大量紅色膠原纖維；纈沙坦干預(yù)組：心肌纖維未見腫脹及斷裂，可見散在猩紅色心肌膠原纖維分布于血管周圍。運用ELISA法測定心肌組織中腎素(Renin)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、活性氧簇(ROS)、丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)相關(guān)指標(biāo)的蛋白表達水平。正常組、模型組及纈沙坦干預(yù)組中的腎素含量(ng/ml)分別是(27.19±2.26)、(41.79±3.70)和(27.1

8、9±2.26)，其中模型組的腎素含量明顯高于對照組及纈沙坦干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，同時纈沙坦干預(yù)組與對照組相比較腎素含量顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。正常組、模型組及纈沙坦干預(yù)組中血管緊張素Ⅱ的含量(ng/ml)分別為(341.94±51.35)、(413.75±69.03)和(348.10±66.97)；醛固酮的含量(ng/ml)分別為(246.50±68.02)、(376.75±85.27)及(264

9、.23±71.03)；活性氧簇的含量(ng/ml)分別為(275.35±71.82)、(355.58±100.13)及(327.38±69.79)；丙二醛的含量(ng/ml)分別為(2.55±0.72)、(3.99±0.93)及(2.72±0.77)，根據(jù)以上結(jié)果均顯示正常對照組與模型組的上述4項指標(biāo)相比較均顯著減低(P<0.05)，而模型組與纈沙坦干預(yù)組及正常對照組相比較均顯著增高(P<0.05)，正常對照組與纈沙坦干預(yù)組相比較差異無

10、統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。正常對照組、模型組、纈沙坦干預(yù)組的超氧化物歧化酶的含量(ng/ml)分別為(144.57±32.13)、(105.41±22.56)和(138.846±18.129)，纈沙坦干預(yù)組中的超氧化物歧化酶含量明顯高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而纈沙坦干預(yù)組中的超氧化物歧化酶含量與正常對照組相比較無明顯差異(P>0.05)。Western blot檢測模型組、纈沙坦干預(yù)組及正常對照組中NOX2的蛋白表

11、達量分別為(0.73±0.12)、(0.44±0.05)及(0.22±0.03)；NOX4的蛋白表達量分別為(0.94±0.18)、(0.65±0.05)和(0.36±0.02)。Western blot檢測NOX2及NOX4的結(jié)果顯示模型組、纈沙坦干預(yù)組及正常對照組三組間兩兩比較均有顯著性差異(P<0.05)，NOX2及NOX4的蛋白表達量在模型組、纈沙坦干預(yù)組及正常對照組中呈依次遞減的趨勢。通過對Western blot結(jié)果分析后提

12、示運用纈沙坦的處理后能顯著降低阿霉素誘導(dǎo)心肌病大鼠的心肌組織中NOX2及NOX4的蛋白表達。
　　結(jié)論：
　　本研究采用經(jīng)典心肌病模型，以心肌毒性藥物阿霉素誘導(dǎo)SD大鼠心肌病，不僅從大鼠一般狀況、心臟超聲表現(xiàn)和病理變化反映了所誘導(dǎo)的SD大鼠出現(xiàn)心肌病心衰損害特征，而且在阿霉素誘導(dǎo)大鼠心肌病的過程中，預(yù)防性給予纈沙坦干預(yù)，從上述三個方面，即一般狀況、心臟超聲和病理變化方面證實減輕阿霉素引起的心臟毒性，減輕了心臟的收縮功能損傷；